Maestría en Ciencias Básicas Biomédicas

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https://hdl.handle.net/20.500.12495/158

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    Caracterización molecular de mecanismos de resistencia a antibióticos de uso clínico en Escherichia coli causante de infección del tracto urinario adquirido en la comunidad en una institución de tercer nivel en Bogotá
    (2011) Castro Cardozo, Betsy Esperanza; Escobar-Pérez, Javier; Leal Castro, Aura Lucia; Vanegas Gómez, Gloria Natasha; Escobar-Pérez, Javier [0000-0002-0432-6978]
    La emergencia de bacterias de importancia clínica multirresistentes es un problema de salud pública a nivel mundial muy importante por el incremento en los costos del tratamiento y las vidas humanas afectadas. Sin embargo, en los últimos años se ha incrementado la circulación de estos patógenos multirresistentes en la comunidad causando diferentes tipos de infecciones como: infecciones gástricas, respiratorias, neumonías e infecciones del tracto urinario (ITU), principalmente. Las ITU adquiridas en la comunidad son causadas en su mayoría por Escherichia coli extraintestinal (grupo filogenético B2 y D), que son más virulentos que los aislamientos intestinales o comensales (grupo filogenético A y B1). Además los aislamientos extraintestinales están aumentando su resistencia a los antibióticos empleados para el tratamiento empírico o de primera elección terapéutica como: sulfonamidas, quinolonas y β-lactámicos. Esto se debe a la adquisición de genes que codifican diversos mecanismos de resistencia, los cuales son transferidos por la incorporación de elementos genéticos móviles como plásmidos, transposones e integrones que tienen la función de almacenar, transportar y facilitar la inserción en el genoma bacteriano de DNA foráneo, lo cual se traduce en un fenotipo de multirresistencia. La vigilancia activa en algunos países del mundo incluyendo latinoamericanos como Brasil han reportado la emergencia de un nuevo clon pandémico de E. coli de circulación en la comunidad, el cual se caracteriza por tener un tipo de secuencia (ST) 131, así como resistencia a todos los antibióticos B-lactámicos (excepto cefamicinas y carbapenemicos) por la acción de una BLEE tipo CTX-M-15, y además pueden tener corresistencia a otros antibióticos como aminoglicósidos, quinolonas, sulfonamidas y tetraciclinas. La mayoría de estos aislamientos son clasificados como patógenos extraintestinales (B2 y D) que pueden tener un perfil de virulencia muy amplio que incluyen toxinas, adhesinas, sistemas de adquisición de hierro y otros factores de virulencia que permiten la invasión y patogénesis que desencadenan una respuestas nocivas por el hospedero, ocasionando cuadros clínicos muy severos o incluso la muerte. En Colombia no ha datos que permitan establecer como es el comportamiento de las ITU, ni la frecuencia de la resistencia de los aislamientos de E. coli y si está circulando el clon ST131. Por esta razón es importante iniciar con la caracterización microbiológica y molecular de aislamientos de E. coli causantes de infección, en pacientes de la comunidad, con el fin de proporcionar datos sólidos de nuestra epidemiologia para, en un futuro, brindar soporte para desarrollar o acoger nuevas guías de manejos y tratamiento de infecciones en la comunidad. Determinar los mecanismos de resistencia a antibióticos de uso clínico en aislamientos de Escherichia coli causantes de infección del tracto urinario adquirida en la comunidad en una institución de tercer nivel en Bogotá. Estudio descriptivo prospectivo, realizado entre Abril a Noviembre del 2009, donde se incluyeron 133 aislamientos de E. coli causantes de ITU en pacientes de consulta externa, urgencias y salas de partos de un hospital de tercer nivel de Bogotá. Ensayos fenotípicos y genotípicos: Se determinó la concentración inhibitoria mínima (CIM) a 8 antibióticos por medio del método de microdilución en agar, siguiendo las recomendaciones dadas por el CLSI (2010). En todos los aislamientos se determinó la presencia de los genes blaCTX-M, blaSHV y blaTEM, que codifican para B-lactamasas, por medio de PCR múltiple. Adicionalmente se detectaron los genes de resistencia a sulfonamidas Sul1, Sul2 y Sul3, tetraciclinas tetA, tetB y tetC, integrones clase 1, 2 y 3 y seis factores de virulencia papC, cnf, hly. fimG/fimH, usp y sfaD/SfaE. La relación genética de los aislamientos se realizó por medio de REP-PCR. De los 133 pacientes analizados, 91 (68.4%) fueron atendidos por consulta externa, 27 (20.3%) en urgencias y 15 (11.3%) en sala de partos. Ciento seis (80.0%) pacientes correspondieron al sexo femenino. Solo el 12.0% de los pacientes presentaron como antecedente diabetes mellitus. Del total de aislamientos analizados se encontró un perfil de resistencia a TET en 87 (65%), AMP 68 (51%), SXT 65 (49%), CIP 46 (34%), GEN 22 (17%), AMK 21 (15%). Dos aislamientos (1,5%) fueron resistentes a cefalosporinas de tercera generación (cefotaxime y ceftazidime) por la presencia del gen bla CTX-M-15, estos aislamientos presentan relación con el clon ST131. Los genes tetA y sul1 fueron detectados en 31(23.0%) y 33(24.8%) de los aislamientos respectivamente. Los integrones 1 y 2 se encontraron en 50(37.5%) y 5(6.7%) aislamientos, respectivamente. El 61% de los aislamientos fueron clasificados como extraintestinales y el restante 39.0% como intestinales. Los aislamientos extraintestinales presentan mayor variabilidad de perfiles de virulencia y presentando un alto porcentaje de los genes fimG/fimH, cnf, hly y papC. Este último con una marcada diferencia entre ambos tipos de aislamientos (extraintestinales 40.0% e intestinales 6.0%). En los aislamientos extraintestinales también se encontraron las adhesinas usp y sfaD/SfaE en 11(13.0%) y 10(12%) aislamientos, respectivamente. En la relación genética de los aislamientos se evidenció que tienen un comportamiento clonal conservando un porcentaje de similiridad mayor al >80% respecto a la cepa ATCC 25922. De los nueve aislamientos seleccionados para determinar la relación genética con el clon ST 131 cinco aislamientos fueron relacionados con este clon. Estos resultados confirman la circulación de aislamientos de E. coli ST131 causantes de ITU adquirida en la comunidad en pacientes colombianos, con y sin la adquisición de la cefotaximasa CTX-M 15. Además se determinó que los aislamientos de E. coli de circulación en la comunidad tienen un comportamiento clonal y que presentan un gran repertorio de factores de virulencia y resistencia (hasta a seis antibióticos). Este estudio también permite iniciar una caracterización del fenómeno de resistencia en aislamientos en la comunidad y así poder en un futuro iniciar un seguimiento epidemiológico.
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    Estudio de la Miosina C de Plasmodium falciparum (PfMYO-C)
    (2011) Aponte Briceño, Samanda Lizbeth; Chaparro Olaya, Jacqueline
    De las cinco especies de Plasmodium que causan la malaria, P. falciparum es la que produce la mayor mortalidad en el mundo, a pesar de los esfuerzos de los países endémicos por implementar diferentes estrategias para su control y potencial erradicación. El conocimiento de los procesos biológicos de P. falciparum es una herramienta clave para la postulación de blancos terapéuticos o blancos para vacunas. Las miosinas son proteínas motoras que participan en muchos de estos procesos en las células eucariotas y hasta el momento en P. falciparum se han identificado seis secuencias que codifican para miosinas y se han caracterizado cinco durante el ciclo intraeritrocitario. Por su transcripción, localización y función, dos de estas miosinas se han visto potencialmente involucradas en el proceso de invasión (Pfmyo-A y Pfmyo-B) mientras que las otras tres (Pfmyo-D, Pfmyo-E y Pfmyo-F) al parecer se encuentran actuando en procesos diferentes aún desconocidos. Pfmyo-C es la única miosina de P. falciparum que aún no se ha caracterizado; sinembargo de esta proteína se conoce su patrón de transcripción y varias características particulares en su secuencia, en especial la presencia de repeticiones de tipo WD40 que sugieren que esta miosina puede estar involucrada en procesos diferentes al de la invasión. El objetivo de este trabajo fue realizar un acercamiento a la caracterización de Pfmyo-C durante el ciclo intraeritrocitario en cuanto a su transcripción, expresión y localización, así como analizar su secuencia empleando herramientas bioinformáticas con el fin de inferir la posible función de esta proteína en P. falciparum. Los resultados obtenidos mediante RT-PCR muestran que la expresión de mARN de Pfmyo-C se da principalmente en el estadío de trofozoitos maduros y esquizontes tempranos, y este patrón correlaciona directamente con la expresión de Pfmyo-C en el estadío de esquizonte temprano determinada por western-blot empleando sueros policlonales obtenidos a partir de ratones inoculados con una proteína recombinante para Pfmyo-C. No obstante, el tamaño detectado de la proteína no correlaciona con el tamaño esperado (250KDa), lo que nos hace sugerir la presencia de un intrón no predicho en las bases de datos, o la existencia de una modificación o procesamiento de la proteína. Con base en los análisis de dominios de Pfmyo-C, podemos sugerir de manera muy preliminar que esta proteína puede estar involucrada en procesos de transducción de señales durante las últimas etapas de desarrollo del parásito dentro del glóbulo rojo.
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    Evaluación de estrategias para la producción de proteínas recombinantes solubles de Plasmodium falciparum, en un sistema procariote
    (2013) Morales de la Pava, Liliana; Chaparro Olaya, Jacqueline; Hernández Atehortúa, Paula Constanza
    La malaria es la enfermedad parasitaria con el mayor número de casos clínicos y muertes reportadas al año, causados principalmente por Plasmodium falciparum, una de las cinco especies que infecta a humanos. Diversas estrategias de control se han implementado para combatir la enfermedad, desde el desarrollo de campañas de educación para evitar la transmisión, hasta el uso de insecticidas y medicamentos contra el vector y el parásito. En miras de desarrollar nuevas estrategias para bloquear la enfermedad, la invasión del parásito al glóbulo rojo ha despertado gran interés en los últimos años, proceso que es llevado a cabo por un complejo de proteínas denominado Glideosoma, que incluye, entre otras proteínas, un motor actina-miosina. Hasta la fecha se han identificado seis miosinas en P. falciparum y solo una de ellas (PfMyoA) ha sido caracterizada como participante activa en el Glideosoma; sin embargo, resultados previos de nuestro laboratorio acompañan la idea de que otra miosina del parásito posiblemente participa en el proceso de invasión. Para retar dicha hipótesis es necesaria la evaluación de interacciones entre todas las proteínas del Glideosoma y la miosina candidata, para lo cual obtener el repertorio completo de las proteínas es imperativo; de esta manera, la producción de proteínas recombinantes se convierte en la estrategia molecular de elección. Sin embargo, la obtención de proteínas recombinantes solubles de P. falciparum es un desafío, debido a características muy particulares en el genoma del parásito. El objetivo de este trabajo fue evaluar estrategias que permitieran la obtención de proteínas recombinantes solubles, bien sea a partir de la expresión soluble o de la recuperación a partir de cuerpos de inclusión, sin la adición de agentes caotrópicos para la solubilización. Adicionalmente, con el fin de conocer si el genoma de P. falciparum tenía más miosinas (diferentes a las ya descritas) se hizo un análisis bioinformático para la búsqueda de nuevas secuencias. Por otro lado, se realizó una comparación de estructuras terciarias entre PfMyoA y nuestro candidato a homólogo funcional (PfMyoB), para lo cual la identificación de similitudes entre las estructuras, soportaría dicha hipótesis. Los resultados obtenidos en la inducción de la expresión soluble, indicaron que ninguno de los parámetros evaluados en la inducción, como temperatura, concentración de IPTG y densidad óptica (DO), tuvo efecto en la solubilidad de las proteínas recombinantes rPfMyoB y rPfGAP50. Sorprendentemente, el uso de vectores con secuencias fusión y bacterias modificadas para la optimización de la traducción y plegamiento, tampoco ofrecieron ventajas significativas sobre la solubilidad, pues solo un poco de expresión soluble se obtuvo con la combinación del vector pMAL y las bacterias chaperonas; sin embargo, la mayoría de la proteína recombinante se concentró junto con los cuerpos de inclusión; por consiguiente nuestros resultados sugieren que la marcada insolubilidad de las recombinantes producidas, está influenciada por características propias de la secuencia proteica (aún no establecidas) y no a condiciones en la inducción de la expresión. Teniendo en cuenta que las recombinantes siempre se expresaron como proteínas insolubles, se desarrolló una estrategia de electro elusión para la recuperación de recombinantes solubles de P. falciparum desde cuerpos de inclusión. Adicionalmente, con base en la comparación de los resultados en la predicción de solubilidad de programas bioinformáticos y los obtenidos experimentalmente, se concluye que la única manera de conocer el comportamiento soluble de las proteínas recombinantes de P. falciparum producidas en Escherichia coli, es mediante el desarrollo experimental.
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    Identificación de las vías de propagación utilizadas por un virus dengue neuroadaptado para ingresar al sistema nervioso
    (2013) Bastidas Legarda, Leidy Yamile; Velandia Romero, Myriam Lucia; Castellanos Parra, Jaime Eduardo
    El Virus del Dengue (DENV), aunque es considerado un virus no neurotrópico, en algunas ocasiones logra ingresar, invadir y alterar el Sistema Nervioso (SN), induciendo manifestaciones neurológicas como dolor de cabeza severo, desórdenes en el comportamiento, convulsiones y parálisis, entre otras. Esto sugiere que el perfil clínico de la enfermedad del dengue está cambiando y que el virus en algunos casos presenta un carácter neurotrópico, neuroinvasivo y neurovirulento, sin embargo, hasta el momento se desconocen los mecanismos asociados a la neuropatogenia por DENV. Recientemente nuestro grupo desarrolló un modelo de neuroinfección en ratones Balb/c utilizando una cepa de DENV-4 neuroadaptada, denominada D4MB-6 que inoculada por la vía intraperitoneal (i.p), infecta el sistema nervioso e induce signos de enfermedad similares a los observados en humanos, sin embargo, los mecanismos que podría utilizar este virus para ingresar e invadir el SN aún no son claros. Los virus naturalmente nerurotrópicos pueden diseminarse por la vía hematógena y llegar a los capilares cerebrales e ingresar al parénquima cerebral atravesando la Barrera Hemato-Encefálica (BHE), como virus libre, asociado a células inflamatorias o infectando células endoteliales de la microvasculatura cerebral. Estos virus también pueden ser capturados por terminaciones nerviosas y viajar por transporte axonal retrógrado hasta el soma neuronal en los Ganglios de Raíz Dorsal (GRD) ó médula espinal y diseminarse dentro del tejido nervioso.
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    Comparación del contenido proteico del esmalte de dientes permanentes sanos y con fluorosis
    (2014) Castiblanco Rubio, Gina Alejandra; Mejía Naranjo, Wilson Alfonso; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Martignon, Stefania
    El esmalte con fluorosis es menos mineralizado y más poroso que el esmalte sano y durante el desarrollo retiene mayor contenido proteico. La evidencia en esmalte fluorótico erupcionado es contradictoria y no se conoce (en comparación al esmalte sano) si tiene mayor abundancia de péptidos, sus características, ni las proteínas de las que provienen. Identificar y comparar el material proteico del esmalte dental erupcionado sano y con fluorosis moderada usando Cromatografía Líquida acoplada a Espectrometría de Masas en Tándem (LC-MS/MS). Se estandarizó el protocolo de extracción de proteínas con TCA. Se obtuvo el extracto proteico del esmalte de 8 molares sanos (n=4) y con fluorosis dental moderada (n=4). Sin digestión previa con tripsina, se analizaron con LC-MS/MS y se utilizó la base de datos de SwissProt usando Mascot 2.3. Se consideraron identificaciones con puntaje ≥24 y se elaboró un listado con los péptidos de AMELX comunes a todas las muestras (puntaje ≥10), se determinó su abundancia relativa y se comparó entre los grupos (sano/fluorosis) con la prueba t-Student. Los sitios naturales de corte se compararon con los reportados en la literatura. Se predijo la estructura terciaria de la amelogenina con el servidor I-Tasser y la cuaternaria con Z-DOCK. Las imágenes se editaron en Pymol. Se identificaron tres proteínas específicas del esmalte: AMELX/Y, AMBN y ENAM, estas dos últimas se reportan por primera vez en esmalte erupcionado. Mientras que AMEL se identificó en todas las muestras, ENAM se encontró solo en el 50% de los dientes fluoróticos. Se obtuvieron las secuencias de 19 péptidos de AMELX comunes a los dos tipos de esmalte que mostraron sitios de clivaje previamente reportados para MMP-20 y KLK-4; tienen de 8 a 18 residuos, masas moleculares menores a 2 kDa, provienen en su mayoría de la región N-terminal y se ubican internamente en nuestra predicción de la estructura terciaria y cuaternaria de AMELX. No encontramos diferencias significativas en la abundancia relativa de los péptidos de los dos tipos de esmalte. Con estos resultados sugerimos un posible papel de ENAM en la patogénesis de la fluorosis dental y soportamos la hipótesis de que en la fluorosis se presenta retraso en el corte de amelogenina y no retención permanente de sus péptidos en el esmalte erupcionado.
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    Evaluación in vitro de la integridad de la barrera hematoencefálica y su alteración causada por el virus dengue
    (2014) Calderón Peláez, María Angélica; Velandia-Romero, Myriam Lucía; Castellanos, Jaime; Calderón Peláez, María Angélica [0000-0003-0788-0795]; Castellanos, Jaime [0000-0003-1596-8383]; Velandia-Romero, Myriam Lucía [0000-0002-3340-7304]
    El sistema nervioso (SN), está protegido por una barrera de difusión celular conocida como Barrera Hematoencefálica (BHE), compuesta por diferentes tipos de células que limitan el paso de moléculas desde los capilares hacia el parénquima cerebral, lo cual garantiza la homeostasis del tejido. A pesar de esto, algunas moléculas y agentes infecciosos logran atravesar la BHE e ingresar al tejido nervioso para inducir graves daños en la fisiología de este. Dentro de los patógenos que logran alterar la BHE e infectar el tejido nervioso, se encuentran algunos miembros de la familia flaviviridae típicamente neurotrópicos, sin embargo el virus del dengue (DENV), un virus considerado no neurotrópico, puede infectar y alterar la fisiología del tejido nervioso ocasionando signos como encefalitis, parálisis y alteraciones motoras y cognitivas que pueden ser permanentes. Para comprender los cambios de tropismo y los factores neurológicos e inmunológicos asociados a la neuroinfección por DENV, en nuestro laboratorio se desarrolló un modelo de neuroinfección en ratones lactantes utilizando una cepa de virus neuroadaptado (D4MB-6), que infecta neuronas y otras células del tejido nervioso e induce la alteración de la BHE en ratones lactantes. Por lo tanto, el presente proyecto buscó evaluar en un modelo de BHE in vitro, si la alteración de la permeabilidad de la barrera endotelial cerebrovascular asociada a la infección con el DENV-4 neuroadaptado o no, favorece el paso de virus libre o asociado a células del sistema inmune lo cual, permitiría la infección y dispersión viral en el tejido nervioso. Para esto, se estableció un modelo de BHE in vitro en monocapa o co-cultivo utilizando cultivos primarios de endotelio cerebrovascular con o sin astrocitos obtenidos a partir de cerebros de ratones lactantes, siendo únicamente las células endoteliales susceptibles a la infección con el virus parental o D4MB-6. Los resultados obtenidos mostraron en ambos modelos de BHE que a las 10 horas post-infección (hpi) con cada virus, hubo una disminución en los valores de resistencia transendotelial (TEER), asociada a un aumento en la permeabilidad. Adicionalmente en este mismo tiempo post infección se detectaron partículas virales infecciosas en la cámara inferior de los insertos, lo que sugiere que la infección ocasionó una alteración en la integridad de las células endoteliales, lo que permitió el paso paracelular de las partículas virales. Se encontró que la infección con el D4MB-6 indujo la relocalización -sin afectar la expresión-, de la proteína ZO-1 y un aumento en la expresión de los transcritos para las proteínas VCAM, PECAM, TNFα y MCP-1 comparado con lo observado durante la infección con el virus parental. Esto último está relacionado con un proceso de activación endotelial que al parecer favoreció el proceso de transmigración de monocitos/macrófagos J774 en ambos modelos de BHE estandarizados. Lo anterior convierte el proceso de alteración de la BHE en uno de los posibles mecanismos utilizados por el DENV para ingresar y dispersarse dentro del tejido nervioso.
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    Propiedades pro inflamatorias de lipopolisacárido de Eikenella corrodens y su capacidad para inducir disfunción endotelial
    (2014) Bernau Gutierrez, Sebastian; Gualtero Escobar, Diego Fernando; Lafaurie Villamil, Gloria Inés
    Eikenella corrodens es un bacilo anaerobio facultativo Gram negativo que hace parte de la flora oral y del tracto respiratorio superior humano. En la cavidad oral, aumenta su prevalencia cuando se asocia a la enfermedad periodontal, y a nivel sistémico se asocia a bacteriemias y endocarditis infecciosas. La periodontitis es una enfermedad multifactorial asociada a un componente poli bacteriano predominantemente Gram negativo en donde la respuesta inflamatoria conlleva a la perdida de los tejidos de soporte del diente y finalmente la perdida dental. Se ha reportado que existe el paso de bacterias periodontales o de sus componentes a circulación desde lesiones periodontales, en donde el sistema inmune del hospedero reconoce al lipopolisacárido (LPS) y se inducen respuestas inflamatorias sistémicas importantes. Estudios in vitro han demostrado que LPS de Porphyromonas gingivalis induce activación de células endoteliales y macrófagos, expresión de moléculas de adhesión en células endoteliales y formación de células espumosas; eventos que contribuirían al desarrollo de aterosclerosis. Así mismo se han encontrado componentes de otros periodontopatógenos como E. corrodens en lesiones ateromatosas y aún se desconocen sus implicaciones en el riesgo cardiovascular. Es por esta razón que este trabajo pretende determinar la capacidad del lipopolisacárido de Eikenella corrodens ATCC (23834) de inducir respuesta pro-inflamatoria en células endoteliales de arteria coronaria humana (HCAEC) y en monocitos humanos (THP-1) in vitro. Para esto se evaluaron los niveles de mRNA y proteína soluble de las citocinas pro-inflamatorias IL-6 y TNF-α y el quimiocina IL-8, mediante qPCR y citometría de flujo. Además se evaluó la expresión de moléculas de adhesión ICAM-1 y PECAM-1 y de receptores toll like (TLR2, TLR4) en células endoteliales mediante cell-ELISA. LPS de E. corrodens ATCC (23834) a diferentes concentraciones (1000 y 100 ng/mL) indujo un perfil de respuesta inflamatoria en células HCAEC y THP-1. En células HCAEC indujo un aumento en la expresión de TLR-2 y TLR4, citocinas pro-inflamatorias (IL-6, IL – 8 y TNF-α) y moléculas de adhesión (ICAM-1 y PECAM-1), mientras que en células THP-1 se presentó aumento en la expresión de citocinas pro inflamatorias (IL-6, IL – 8 y TNF-α) aunque no se encontró aumento en la expresión de TLR-2 y TLR4 en esta línea celular. Estos resultados sugieren que el LPS de E. corrodens al igual que el LPS de P. gingivalis está participando activamente en inducir una respuesta pro-inflamatoria que promueve procesos que desencadenan disfunción endotelial relacionada con aterosclerosis.
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    Evaluación de la terapia larval de Sarconesiopsis magellanica (Diptera: Calliphoridae) en un biomodelo animal
    (2014) Díaz Roa, Andrea; Bello García, Felio Jesús; Cortés Vecino, Jesús Alfredo
    Para los tratamientos alternativos de heridas crónicas, de difícil cicatrización, se emplean larvas de díptero Lucilia sericata (Meigen, 1826), las cuales son eficaces en procesos de terapia larval. La acción de las larvas se desarrolla con base en tres mecanismos fisiológicos diferentes: debridación, eliminación de bacterias y estimulación del tejido de granulación. Esta mosca es de distribución cosmopolita y es considerada la más eficaz. Sin embargo, en ocasiones resulta difícil conseguir muestras de la mosca, principalmente en épocas de lluvias. Se ha reportado el uso de otros insectos necrófagos pero no han igualado la eficacia de L. sericata. En razón a lo anterior, se requiere continuar estudiando nuevas especies que puedan ser similares y/o superiores en sus mecanismos de acción a la mosca señalada. Esta especie se ha registrado como primer colonizador de cuerpos en descomposición en la Sabana de Bogotá y no se ha reportado como potencial generador de miasis facultativa, entiéndase como la contaminación ocasional con larvas en heridas preexistentes. Para evaluar los efectos de Sarconesiopsis magellanica (Le Guillou, 1842) de manera integral se siguieron diferentes metodologías tanto in vivo como in vitro. In vivo: Para evaluar cicatrización se indujo Diabetes y luego heridas en el dorso a 12 conejos, que fueron divididos en 4 grupos, los dos primeros se trataron con terapia larval derivada de S. magellanica y L. sericata, el tercero con antibiótico y el cuarto como control. Antes de los tratamientos, las heridas se infectaron con P. aeruginosa y S. aureus. Además, antes y durante los tratamientos se tomaron biopsias de las heridas para análisis histopatológicos. La evaluación macroscópica de las heridas se valoró con la escala PUSH, Wollina y DPI. In vitro: Se determinó la acción antibacterial de S. magellanica, mediante ensayos turbidométricos y de crecimiento en agar utilizando Staphyloccocus aureus y Pseudomonas aeruginosa. Se comparó este efecto con las excreciones y secreciones (ES) obtenidas de L. sericata, y se evaluó su acción en diferentes concentraciones de ES. En el modelo in vivo, se encontró disminución bacteriana luego de aplicar los tratamientos con terapia larval y antibiótico, de igual forma el debridamiento de la herida fue más ágil con los tratamientos larvales en comparación con los controles; sin embargo, el tiempo de cierre de la herida fue aproximadamente de 23 días en los tratamientos, con ligeras diferencias entre los grupos. Las heridas tratadas con larvas, avanzaron más rápido hacia la proliferación celular, observándose presencia de fibroblastos y células epiteliales, sin encontrar diferencias entre las especies de mosca evaluadas. Los resultados de los métodos de turbidimetria y dilución en agar, mostraron que las ES tanto de L. sericata como de S. magellanica tienen actividad antimicrobiana frente a las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas encontrando diferencias entre las especies evaluadas, indicando que S. magellanica puede ser más eficiente en la inhibición de bacterias, tanto Gram-negativas como Gram-positivas, que L. sericata. Adicionalmente, estas ES no mostraron efectos citotóxicos en una línea celular de fibroblastos. Estos resultados tendrán implicaciones en estudios aplicados de terapia larval con S. magellanica, al establecerse que las interacciones entre ES larvales y las bacterias es el mecanismo más importante empleado en la desinfección. Este estudio validó la larvaterapia con S. magellanica como alternativa para el tratamiento y cicatrización de heridas crónicas evidenciando resultados positivos tanto a nivel microbiológico como in vivo.
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    Evaluación de la excitotoxicidad por glutamato inducida por el virus dengue neuroadaptado D4MB-6
    (2015) Camacho Ortega, Sigrid Johanna; Velandia Romero, Myriam Lucia; Castellanos Parra, Jaime Eduardo
    El virus de dengue (DENV), a pesar de ser clasificado como un virus no neurotrópico, induce durante la infección manifestaciones neurológicas como la alteración de la conciencia. Hasta el momento, los signos y síntomas neurológicos que aparecen durante la infección por DENV no se han asociado a un mecanismo en particular. Durante la infección con el JEV, WNV y el HIV se produce la disfunción y muerte de neuronas mediada por procesos excitatorios. Para Dengue, hasta el momento sólo se ha reportado en modelos in vivo e in vitro y en muestras post-mortem el daño del tejido y la perdida neuronal, sin embargo no se conoce si durante la infección con este virus suceden eventos excitotoxicos o si la la exacerbada respuesta inmune afecta la superviviencia neuronal En el presente estudio se planteó -utilizando el modelo de neuroinfección desarollado en nuestro laboratorio-, evaluar las posibles causas de alteración y muerte neuronal inducidas por la cepa D4MB-6 y el efecto de dos fármacos, ácido valproico (VPA) y MK-801 con el fin de. Para esto, se infectaron ratones Balb/C de 7 dpn con el D4MB-6 tratados o no tratados con VPA o MK 801. Los animales fueron observados y pesados diariamente por 3 o 6 dpi y sacrificados para la extracción del encéfalo y médula. De estos tejidos se obtuvieron homogenizados o cortes histológicos para evaluar la infección y producción viral, la morfología, la expresión de algunas proteínas pro y anti-apoptóticos. En los animales infectados no tratados, las manifestaciones clínicas fueron evidentes al 3er dpi y severas al 6to dpi, al igual que las alteraciones histológicas, caracterizadas por apoptosis, necrosis y espongiosis neuronal acompañadas de alteraciones vasculares como hemorragias, edema e infiltrado de células mononucleares. En esta misma, condición se observó astrogliosis, neurodegeneración y aumento en la expresión de proteínas pro-apoptóticas, como Casp 3, 8, y Bax. Por el contrario, en los animales infectados y tratados todas las manifestaciones y alteraciones neurológicas fueron reducidas, detectando sólo algunas células en apoptosis y neurodegeneración en el cerebelo de animales infectados y tratados con VPA y MK 801, al igual que la producción y transcritos pro- apoptóticos. Estos resultados sugieren que el virus D4MB-6 induce encefalitis y mielitis, como alteración vascular, así como muerte neuronal mediada por procesos excitotóxicos e inmunológicos. Dichas alteraciones son prevenidas de forma total o parcial con los fármacos MK 801 y VPA.
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    Efecto in vitro de una solución estabilizada de ácido hipocloroso (HOCl) para uso odontológico sobre la expresión de factores de crecimiento y el ciclo celular en fibroblastos orales humanos
    (2016) Calderón Mendoza, Justo Leonardo; Perdomo, Sandra Janeth; Lafaurie Villamil, Gloria Ines
    La reparación de los tejidos de la mucosa oral después de una lesión requiere un balance entre la producción de citocinas y factores de crecimiento permitiendo la reparación tisular. En algunas circunstancias clínicas, se utilizan enjuagues que favorecen el proceso de reparación de los tejidos. Sin embargo, las alternativas disponibles en el mercado a pesar de usarse a bajas concentraciones, tienen un alto grado de citotoxicidad. El HOCl es una solución antimicrobiana utilizada por más de 10 años en Colombia, en el tratamiento de heridas de piel y mucosas. Su eficacia antimicrobiana y efectos sobre la reparación tisular demostrados en el uso médico, lo hacen una importante alternativa terapéutica para ser utilizada para el tratamiento de heridas de la mucosa oral. En este trabajo se evaluó el efecto de una solución estabilizada de HOCl pH 5.6 (+/-0.2) diseñada para uso odontológico sobre la línea celular de fibroblastos gingivales humanos (HGnF 2620), con el fin de elucidar mecanismos celulares y moleculares que puedan proponer al HOCl, como una alternativa terapéutica para la reparación de heridas de cavidad oral. Para ello, se evaluó la citotoxicidad, los niveles en la expresión de los genes TGFΒ, FGF, NFkB, VEGF, EGF como marcadores de reparación y BAX, p53, BCL2 y E2F como marcadores de apoptosis y ciclo celular. Se evaluó el efecto del HOCl sobre el contenido de ADN por citometría de flujo y la expresión de proteínas IP3k/AKT, JNK, ERK y P38 MAPK en FGH expuestos a tratamientos con HOCl por western blot. . La expresión de los genes en función a la concentración y tiempo de exposición a HOCl se analizó por ANOVA de dos vías. Los resultados muestran que el HOCl tiene efectos sobre los FGH dependientes de concentración y pH. A concentraciones de ≤47,5µM detiene el ciclo celular de los FGH e induce aneuploidia. A concentraciones entre 95µM y 190µM el HOCl estimula la expresión de los factores de crecimiento TGF-β, FGF y VEGF y activa proteínas de la familia MAPK (ERK). En conclusión el HOCl está involucrando en importantes vías de señalización de reparación tisular dependiendo de concentración y pH, hallazgos que permiten considerar su uso como posible alternativa terapéutica en el tratamiento de lesiones en cavidad oral.
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    Identificación de genotipos del virus de la hepatitis b y mutaciones en los genes p y s, a partir de muestras de sueros procedentes de treinta y dos departamentos de Colombia, 2002 – 2014.
    (2017) Forero Castro, Nidia Janeth; Peláez Carvajal, Dioselina; Laiton Donato, Katherine
    La hepatitis B es una enfermedad causada por el virus de la hepatitis B (VHB) que es el tipo más grave de hepatitis vírica en todo el mundo constituyéndose así en un importante problema de salud pública. Se estima que 257 millones de personas están infectadas crónicamente con el virus de hepatitis B y que todavía hay acceso limitado al diagnóstico y tratamiento de la hepatitis B en muchos contextos con recursos limitados. En Colombia el patrón de endemicidad es heterogéneo con circulación de diferentes genotipos virales. El virus de hepatitis B tiene una alta tasa de mutaciones a lo largo del genoma que le confieren resistencia a la terapia antiviral o le permiten escapar de la respuesta inmune del hospedero tras la vacunación o por infección natural y en otros casos causar infección oculta y progresión a carcinoma hepatocelular (CHC). Identificar genotipos del virus de la hepatitis B (VHB) y mutaciones en los genes S y P en muestras de la seroteca del laboratorio de virología del Instituto Nacional de Salud recolectadas de los treinta y dos departamentos de Colombia durante el período 2002 a 2014. A partir de 495 muestras de suero positivas para HBsAg se realizó detección molecular y posteriormente secuenciación de una región de 1591 nucleótidos correspondiente a los genes P y S. Finalmente se realizó análisis filogenético e identificación de mutaciones de resistencia y escape. En 66 muestras (13,3%) se logró la detección molecular del genoma viral y 28 muestras (42,4%) fueron exitosamente secuenciadas. El análisis filogenético permitió identificar los genotipos/subgenotipos F3 y A2. La muestra 49884_Cundinamarca_CO_2003 presentó simultáneamente las sustituciones asociadas con resistencia L180M y M204V, mientras que la muestra 60265_Cesar_CO_2004 presentó la mutación de resistencia I169L. Se identificó la mutación P120Q en la muestra 48877_Guaviare_CO_2002. Dos de las muestras presentaron una deleción de 105 nucleótidos en la región preS1-preS2. Se confirmó la circulación en Colombia de los genotipos/subgenotipos F3 y A2, y se detectó presencia de mutaciones de resistencia y escape. El presente estudio constituye un aporte en la epidemiologia molecular del VHB en Colombia y la búsqueda de mutaciones en los genes seleccionados es valiosa durante la toma de decisiones en la elección de la terapia antiviral.
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    Asociación entre polimorfismos de los genes DC-SIGN, TNF-α y FcγRiia y la susceptibilidad a la infección por dengue
    (2017) Parra Alvarez, Shirly Julieth; Coronel Ruiz, Carolina; Delgado Tiria, Felix Giovanni
    El dengue es una arbovirosis ampliamente distribuida en países tropicales y subtropicales, la cual es transmitida por artrópodos del genero Aedes. La infección puede cursar de forma asintomática o presentar un amplio espectro de manifestaciones clínicas que pueden tener un desenlace fatal. Las características genéticas del hospedero pueden influenciar su respuesta inmunológica y por tanto la susceptibilidad a la infección y la severidad de la enfermedad. El presente estudio estableció la relación de los polimorfismos de nucleótido simple (SNPs) en los genes DC-SIGN (rs4804803), FcγRIIa (rs1801274) y TNF-α (rs1800629) con la infección por dengue en niños entre 4 y 14 años residentes en una zona endémica de Colombia. Se analizaron 230 muestras de los municipios de Anapoima, Apulo y Girardot del departamento de Cundinamarca, las cuales se caracterizaron por serología y detección de ARN viral. Lo anterior permitió la selección de tres grupos de estudio: el grupo control (n=37), el grupo de infecciones asintomáticas (n=138) y el grupo de infecciones sintomáticas (n=55) conformado por pacientes con DCSA (n=48) y DG (n=7) Los tres SNPs cumplieron el equilibrio de Hardy-Weinberg, la presencia del SNP para DC-SIGN, no presentó asociación con la susceptibilidad a la infección o la enfermedad. El SNP del gen FcγRIIa, se identificó como factor protector en el grupo de infecciones asintomáticas respecto al grupo control (OR=0.51, p=0.010), y como factor de riesgo al comparar el grupo de infección sintomática respecto a las asintomáticas (OR=1.73, p=0.018). La presencia del SNP del TNF-α (rs1800629), se relacionó como factor de riesgo al comparar tanto las infecciones asintomáticas como sintomáticas con el grupo control OR=4.60 (p=<0.0001) y OR=2.95 (p=0.003), respectivamente. Se identificaron 17 combinaciones genotípicas, en el grupo control se encontró con mayor frecuencia la presencia de un SNP, a diferencia de los grupos de infección en los que se observaron dos o los tres SNPs. La combinación de los SNPs DC-SIGN y FcγRIIa se asoció con protección a la infección por DENV (OR=0.21, p=0.028). Por el contrario, la presencia conjunta de los polimorfismos en DC-SIGN y TNF-α se asoció como factor de riesgo para desarrollar síntomas durante la infección por DENV (OR=12.92, p=0.0005). Estos resultados muestran la asociación entre la presencia de los polimorfismos en los tres genes evaluados y la suceptibilidad a la infeccion.
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    Frecuencia de serotipos de Aggregatibacter actinomycetemcomitans, clon JP2 y de los genes de la toxina de distensión citoletal, (cdtABC) en aislamientos de pacientes con Periodontitis
    (2017) Leal Pinilla, Sandra Guiomar; Castillo Perdomo, Diana Marcela
    El Aggregatibacter actinomycetemcomitans ha sido asociado a enfermedad periodontal, particularmente a periodontitis agresiva. La leucotoxina y la toxina de distensión citoletal, son dos importantes factores de virulencia de A.actinomycetemcomitans, cuya relación con los serotipos más frecuentes (a,b,c) presentes en diferentes poblaciones, podrían contribuir a la progresión de la enfermedad. Objetivo: Los objetivos de este estudio fueron examinar la frecuencia de serotipos del A. actinomycetemcomitans, clon JP2 y de los genes de la Toxina de distensión citoletal (cdtABC) en aislamientos de pacientes colombianos con diferentes condiciones periodontales. Materiales y métodos: Un total de 47 muestras de placa y saliva, positivas para A.actinomycetemcomitans, fueron analizadas. Se determinó la presencia de los serotipos a, b c, clon JP2 y de los genes cdtABC por PCR. Se realizaron comparaciones entre los grupos de periodontitis crónica, periodontitis agresiva y sujetos sin enfermedad periodontal por la prueba de Chi cuadrado/exacta de Fisher con un nivel de significancia del 5%. Resultados: El serotipo de mayor frecuencia correspondió al serotipo c (61.7%), seguido por el serotipo b (6.38%) y serotipo a (2.13%). Los aislamientos positivos para la presencia de los genes cdtABC correspondieron al 40.4%. El clon JP2 no fue identificado en ninguna de las muestras. No se observó una correlación estadística entre el serotipo y genotipo con enfermedad periodontal en la población Colombiana examinada. Sin embargo, se observó una tendencia para la asociación entre serotipo c y el operón cdt p=0.16. Conclusiones: Todos los aislamientos correspondieron a cepas de baja leucotoxicidad. Se requiere más estudios para el análisis de la frecuencia de los serotipos del A.actinomycetemcommitans y de sus factores de virulencia, que puedan implicar una posible diferenciación en el diagnóstico.
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    Caracterización epidemiológica y molecular de protozoos intestinales (Blastocystis, Giardia, Cryptosporidium y complejo Entamoeba histolytica/dispar/moshkovskii), en población infantil y canina de la comuna ocho de Popayán (Cauca, Colombia)
    (2018) Villamizar Soler, Sandra Ximena; Ramírez González, Juan David; Reinel Vásquez, Luis
    Antecedentes: Las infecciones parasitarias, particularmente las causadas por protozoos, representan un considerable problema de salud pública en Colombia, afectando a población infantil debido principalmente a factores inmunológicos, ambientales y socioeconómicos. Entre los protozoarios, Blastocystis spp., Giardia duodenalis (sinónimo de G. intestinalis y G. lamblia), Cryptosporidium spp. y miembros del complejo Entamoeba histolytica/dispar/moshkovskii son las causas etiológicas más comunes de las infecciones intestinales parasitarias. Metodología: Un estudio descriptivo de corte trasversal fue llevado a cabo en una población infantil en edad escolar de 12 y 54 meses que asisten al hogar infantil pequeñines de la comuna ocho de Popayán, Cauca (Sur oeste Colombia). Un total de 266 muestras fecales fueron recolectadas (258 de niños y 8 de mascotas). Blastocystis spp., Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp, y miembros del complejo Entamoeba histolytica/dispar/moshkovskii fueron identificados por microscopia y PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) y PCR convencional, la concordancia de qPCR y microscopía se evaluó utilizando el índice Kappa. A partir de las muestras positivas por PCR en tiempo real (qPCR) se realizó caracterización molecular llevando a cabo la amplificación y secuenciación de marcadores moleculares para la identificación de subtipos de Blastocystis spp. (18S); ensamblajes de Giardia (TPI y GDH) y especies/subtipos de Cryptosporidium spp. (18S y GP60). De acuerdo con los resultados, mediante análisis bivariados, se determinó la existencia de asociación entre el parasitismo intestinal y las variables sociodemográficas. Resultados: Un total de 258 muestras fecales de niños se analizaron por microscopia y 255 por PCR en tiempo real (qPCR). Obtuvimos una frecuencia de infección de Blastocystis spp. de 25,19% (microscopia) y 39,22% (qPCR); para Giardia duodenalis 8,14% (microscopia) y 10,59% (qPCR); Cryptosporidium spp. fue identificado únicamente por qPCR 9,8% y miembros del complejo Entamoeba histolytica/dispar/moshkovskii 0,78% (microscopia) y 0,39% (PCR convencional). La concordancia entre microscopia y qPCR fue muy baja. Con relación, a los subtipos de Blastocystis spp. se identificaron los ST1 (alelos 4, 8, 80), ST2 (alelos 11, 12, 15), ST3 (alelos 31, 34, 36, 38,57, 151) y ST4 (alelos 42 y 91). Para Giardia duodenalis se identificaron los ensamblajes AII, BIII, BIV y D; se encontraron las especies C.parvum subtipo IIa y C. hominis subtipo IbA9G3R2; el único miembro del complejo Entamoeba identificado corresponde a E. histolytica. Por otra parte, en las heces de las mascotas se identificó Blastocystis spp. ST1 (alelo 4), Giardia duodenalis ensamblaje BIII y C.parvum subtipo IIa. No se encontró asociación estadísticamente significativa entre la infección parasitaria y las variables sociodemográficas evaluadas. Conclusión: Este estudio revela la prevalencia de Blastocystis spp., Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp. y miembros del complejo Entamoeba histolytica/dispar/moshkovskii y la distribución de los subtipos/ensamblajes/especies en la población infantil de Popayán; la presencia de estos protozoos en animales domésticos podría estar implicada en la transmisión.
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    Estudio descriptivo de alteraciones moleculares en los genes RAS, BRAF y genes del sistema de reparación de ADN (MMR) en un grupo etario de pacientes diagnosticados con cáncer colorectal
    (2018) Roa Agudelo, Diana Milena; López Riveros, Rocío del Pilar; Morantes Medina, Sandra Johanna
    El Cáncer Colorectal (CCR) en Colombia es una de las neoplasias de mayor incidencia y mortalidad en ambos sexos. Se caracteriza por una gran heterogeneidad genética que resulta de la acumulación de alteraciones moleculares que intervienen en tres vías principales: la vía de Inestabilidad Cromosómica (INC), la vía de Inestabilidad de Microsatélites (IMS) y la vía de metilación de islas CpG (CIMP). Durante la última década se ha observado un aumento significativo en la incidencia de esta neoplasia en adultos jóvenes. Se ha descrito que las características clínico e histopatológicas al igual que el perfil molecular de los tumores en los adultos jóvenes es diferente con respecto a los tumors que presentan los adultos mayores. El propósito de este trabajo es describir las características clínico e histopatológicas y algunas de las alteraciones moleculares involucradas en el desarrollo de estos tumores en un grupo etario de pacientes en la población colombiana. Se analizaron los datos clínicos e histopatológicos de 99 casos de CCR, clasificados en tres grupos de edad: grupo 1 (< 49 años), grupo 2 ( 50 -  64 años) y grupo 3 (> 65 años); a los cuales se les realizó el análisis mutacional en los genes KRAS, NRAS, BRAF los cuales están relacionados con la vía INC, se evaluó la inestabilidad de microsatélites. Los resultados mostraron que de los tumores evaluados el 45,45% (45/99) presentaron el fenotipo Silvestre y el 54,54% (54/99) presentaron mutaciones en los genes KRAS o BRAF; se identificó una mayor presencia de la mutación del gen KRAS exón 2, codón 12 en los grupos 1 y 2 (p = 0,02); siendo las mutaciones más frecuentes G12D, G12V y G13D. En 11,76% (6/51) de los tumores colorectales analizados se identificó la mutación en el gen BRAF exón 15, codón 600. No se observó asociación entre la presencia de inestabilidad de microsatélites y los grupos de edad evaluados (p = 0,67). En el 13,14% (13/99) de los tumores CCR se observó pérdida de expresión de las proteínas, siendo los heterodímeros MSH2-MSH6 y MLH1-PMS2, los más frecuentemente alterados. En conclusión, los resultados mostraron que los grupos 1 y 2 presentaron diferencias en la frecuencia de mutaciones en el gen KRAS exón 2 respecto a la observada en el grupo 3; la mutación más frecuente en estos dos grupos fue G12D. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre las variables clínico e histopatológicas entre los grupos de edad analizados. Adicionalmente, se resalta la importancia de realizar el análisis de mutaciones en los genes RAS, BRAF e identificar el estado de IMS en los tumores CCR, como biomarcadores predictivos y pronósticos.
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    Presencia del polimorfismo -308 del TNF-α y su relación con inmunogenicidad, niveles séricos de fármacos anti-TNF-α y respuesta clínica en pacientes con Artritis Reumatoide y Espondiloartritis en el Hospital Militar Central
    (2019) Díaz Pupo, Flor Vanessa; Romero Sánchez, María Consuelo
    El TNF-α está involucrado en la fisiopatología de las Espondiloartritis (EAS) y la Artritis Reumatoide (AR). La presencia de polimorfismos a nivel de la región promotora se ha relacionado con susceptibilidad, en especial el -308 del TNF-α (A/G). El tratamiento con Anti-TNF-α disminuye la inflamación y es el tratamiento de segunda línea previa falla al manejo convencional. Sin embargo, algunos pacientes fallan al tratamiento debido a la inmunogenicidad generada contra los fármacos. Establecer la presencia del polimorfismo -308 del TNF-α y su asociación con inmunogenicidad, niveles séricos de fármacos anti-TNF-α con la actividad clínica en pacientes con AR y EAS en el Hospital Militar Central. Un total de 266 individuos: 55 con EAS, 56 con AR tratados con Adalimumab, Infliximab o Etanercept y 155 controles, fueron analizados. Se obtuvieron variables clínicas sobre el nivel de actividad de la enfermedad, funcionalidad del paciente y variables socio-demográficas. Se determinó la presencia del SNP -308 del TNF-α por PCR-RFLP y tanto las concentraciones séricas de los fármacos biológicos como de ADAs (en inglés, Anti-drug-antibodies) se llevaron a cabo mediante la técnica de ELISA con el Kit PROMONITOR®. Se realizaron asociaciones estadísticas con la prueba Chi2, comparaciones de medianas con el test U Mann-Whitney y también se usó el coeficiente de correlación de Pearson, con un nivel de significancia de p<0.05. La presencia del alelo G en los pacientes con EAS y en tratamiento con Adalimumab mostraron significancia al comparar los niveles de la proteína C reactiva (PCR) (p=0.02), y la presencia del alelo A se asoció con discapacidad en los pacientes con AR a través del índice HAQ-DI (p=0.044). Adicionalmente, los pacientes con EAS, ADAs positivos y en tratamiento con Infliximab, manifestaron índices clínicos activos y de disfunción (BASDAI p=0.0029 y BASFI p=0.016). En los pacientes con AR se halló la misma tendencia (DAS28VSG p=0.019, CDAI p=0.008 y HAQ-DI p=0.04) Estos resultados sugieren la falta de respuesta frente a fármacos biológicos por la presencia de ADAs, en especial para Infliximab, y la influencia del SNP-308 del TNF-α sobre algunos de los marcadores de inflamación e índices de disfunción.
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    Análisis de variantes polimórficas en el gen CDKN2A en muestra de pacientes con melanoma
    (2020) Tovar Parra, Jose David; Gutierrez Castañeda, Luz Dary
    El melanoma es el tipo de cáncer de piel más agresivo y tiene un mal pronóstico en estadios avanzados. Las tasas de incidencia y mortalidad han aumentado en los últimos años. Las variantes p.R24P, p.M53I, p.G101W, p.V126D y p.A148T en el gen CDKN2A (HGNC ID: 1787) han sido asociadas con el desarrollo de melanoma en diferentes poblaciones, sin embargo, la frecuencia de estas variantes y su asociación con el desarrollo de melanoma no ha sido estudiada en Colombia. Para esto, el objetivo de este estudio fue analizar las variantes del gen CDKN2A en la población colombiana. Para el desarrollo se usó la siguiente metodología, se invitaron a participar a sujetos con diagnóstico de melanoma y sujetos sanos mediante la aplicación del consentimiento informado (85 casos y 166 controles). Para esto, se tomaron muestras de sangre a los sujetos participantes, estos sujetos se genotipificaron mediante el ensayo HRM-qPCR y se detectaron variantes en los exones 1 y 2 del gen CDKN2A, estas variantes se confirmaron por medio de secuenciación por Sanger. Para los análisis estadísticos se utilizaron diferentes pruebas como la prueba de chi-cuadrado para comparar las distribuciones de alelos y genotipos entre casos y controles. Se calculó la razón de probabilidades (OR) con intervalo de confianza (IC) del 95% para determinar la asociación entre polimorfismos y haplotipos con la susceptibilidad al melanoma. Los análisis estadísticos y de haplotipos se realizaron utilizando Stata® y RStudio®. Resultados. Cincuenta y cuatro por ciento de las mujeres fueron identificadas tanto en casos como en controles. Las frecuencias de los subtipos de melanoma fueron 36,47% lentigo maligno, 24,71% lentiginoso acral, 23,53% extensión superficial y 15,29% nodular. Las variantes en el gen CDKN2A fueron 11,76% en casos y 8,43% en controles. El más frecuente fue p.A148T en el 5,88% de los casos y en el 4,82% de los controles. El haplotipo GGTTG mostró diferencias estadísticamente significativas entre casos y controles (valor de p = 0,04). Conclusión. Los polimorfismos de CDKN2A p.G101W, p.R24P, p.M53I y A148T no están asociados con la susceptibilidad al melanoma en la población colombiana; Se requieren más estudios sobre la interacción genética y los efectos aditivos entre más variantes.
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    Potencial antiproliferativo de un extracto de curuba Passiflora mollissima (Kunth) L.H. Bailey sobre un modelo de cultivo 3D tipo esferoide de células de cáncer oral
    (2020) Fonseca Benítez, Angela Victoria; Perdomo Lara, Sandra Janneth; Morantes Medina, Sandra Johanna
    La curuba (Passiflora mollissima (Kunth) L. H. Bailey) ha mostrado tener efecto antiproliferativo y quimioprotector observado en variedad de células cultivadas en monocapa. Por otro lado, los esferoides tumorales presentan características muy similares a los tumores in vivo, por lo que han sido ampliamente utilizados en el tamizaje de nuevos compuestos con potencial antitumoral. En consecuencia, el objetivo del presente estudio fue evaluar el potencial antiproliferativo de un extracto de curuba (Passiflora mollissima (Kunth) L. H. Bailey) sobre un modelo de cultivo 3D tipo esferoide de células de cáncer oral. Para esto, se realizó la caracterización del cultivo tridimensional de células CAL 27 y se trató durante 72 h con tres concentraciones del extracto de curuba (10, 50 y 100µg/ml) empleando como control positivo el medicamento cisplatino a 20µM. Se determinó la viabilidad celular con el método de resazurina, así como los cambios morfológicos de los esferoides a partir del análisis de imágenes y tinción con hematoxilina y eosina. Se evaluó el efecto antiproliferativo mediante el ensayo clonogénico y el ensayo de doble tinción Hoechst/ Ioduro de propidio, además de la expresión de 6 genes relacionados con muerte celular y metástasis (HIF-1α, p53, BCL-2, BAX, CDH1 y MMP 9), así como la evaluación del efecto sobre las fases del ciclo celular. Los resultados mostraron un efecto antiproliferativo dosis dependiente del extracto de curuba, así como el aumento de la expresión génica de p53, HIF 1α y CDH1. Por último, el extracto de curuba detuvo principalmente las células en la fase G0/G1 y S del ciclo celular. En conclusión, el presente estudio es el primero en evidenciar que el extracto de P. mollisima inhibe el crecimiento y la proliferación de las células tumorales orales cultivadas en esferoides a través de la regulación positiva de genes involucrados en procesos de muerte celular y metástasis.
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    Evaluación del desempeño de diferentes pruebas serológicas y virologicas para la confirmación de casos de infección por CHIKV en niños con síndrome febril
    (2021) Jaimes Jaimes, Nayeli Alejandra; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Jaimes Jaimes, Nayeli Alejandra [0000-0001-8274-8562]
    Introducción: El diagnóstico de laboratorio es importante para la confirmación de los casos probables de infección por virus de chikungunya (CHIKV) y se recomienda usar pruebas moleculares basadas en la detección del genoma viral por PCR previa transcripción inversa, en muestras recolectadas durante la fase febril. Objetivo: Evaluar el desempeño de diferentes métodos de detección de RNA viral de CHIKV en muestras de individuos con sospecha de arbovirosis. Metodología: Se realizó extracción de RNA a muestras de suero de individuos febriles, y se procesaron por el método descrito por Calvo et al, en 2016 como estándar de diagnóstico. Simultáneamente se procesaron por una PCR anidada y dos qPCR utilizando los cebadores reportados por Pastorino en 2005 y Lanciotti en 2007. Los datos obtenidos se analizaron en Stata, evaluando la frecuencia de muestras positivas y comparando las variables operativas de cada una de las pruebas. Determinando la sensibilidad y especificidad de cada una de las pruebas. Resultados: Del total de las 196 muestras analizadas, el 83,16% fueron positivas para la RT-qPCR dirigida contra el gen E1, el 79,59% positivas para la qPCR dirigida contra el gen nsP4, el 73,47% y 75% resultaron positivas en las PCR anidada dirigida contra el gen E1 y NSP4 respectivamente. La sensibilidad y especificidad de la qPCR de Pastorino fue de 90.0% (IC 84.2%-93.8%) y 39.1% (IC 26.4%-53.5%), mientras que los valores de sensibilidad obtenidos en la PCR anidada fueron 95.7% (IC 91.2%-98%) y 83.3% (IC 76.6%-88.4%), mientras que la especificidad fue de 98.9% (IC 90.6%-99.9%) y 54,3% (IC 40.2%-67.8%) respectivamente. Conclusión: Los resultados indican que la qPCR realizada con los cebadores de Pastorino presenta una sensibilidad superior respecto a las dos PCR anidadas, lo cual sugiere que esta prueba permitiría identificar un mayor número de casos.
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    Carga parasitaria, distribución espacial, y diversidad genética de Leishmania spp en personal militar del Ejército Nacional de Colombia con Leishmaniasis cutánea
    (2021) Pérez Rico, Julie Janeth; Cantillo Barraza, Omar; Correa Cardenas, Camilo; Pérez Rico, Julie Janeth [0000-0002-2908-6982]
    Antecedentes: Las leishmaniasis son un grupo de enfermedades de transmisión vectorial causada por parásitos protozoarios del género Leishmania transmitido por insectos flebótomos hembras. Dentro de las manifestaciones clínicas de la enfermedad está la leishmaniasis cutánea (LC), mucocutánea (LMC) y visceral (LV). Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), las leishmaniasis están presentes en 98 países, con una incidencia de 1,3 millones de casos anuales. En Colombia, el 98% de los casos reportados corresponden a LC y de estos, alrededor del 50% corresponden a pacientes de las Fuerzas Militares debido a sus operaciones en áreas endémicas. Actualmente, en el Ejército Nacional de Colombia se lleva un estricto seguimiento clínico al tratamiento con antimoniato de meglumina, sin evidencia científica de la resolución de la enfermedad por métodos moleculares, lo que conlleva a eventos adversos por fallas terapéuticas o recidivas, generando altos costos en la logística Militar. Objetivos: Los objetivos del estudio fueron cuantificar la carga parasitaria, evaluar la efectividad del tratamiento (1er esquema antimoniato de meglumina y 2do esquema isetionato de pentamidina) mediante métodos moleculares y determinar la distribución, y diversidad genética de Leishmania spp en personal militar del Ejército Nacional de Colombia con leishmaniasis cutánea entre el 2017 – 2019. Metodología: Se recolectaron muestras de frotis / biopsia y sangre periférica en 136 pacientes con LC. El ADNk del minicírculo se amplificó mediante qPCR. Se realizaron pruebas no paramétricas y análisis de componentes principales (ACP) con datos clínico-epidemiológicos y moleculares. Las especies de Leishmania se identificaron mediante BLASTn de acuerdo con las secuencias de HSP70 y MPI. La distribución geoespacial de los parásitos identificados se determinó según el posible sitio de infección. Se construyeron árboles genéticos por verosimilitud máxima (VM), se estimaron índices de diversidad (π, h) y se construyó una red de haplotipos bajo el algoritmo Templeton-Crandall-Sing para determinar las relaciones geográficas de las variantes genéticas de las especies de Leishmania que circulan en la población militar colombiana. Resultados: El 83,09% de los pacientes al finalizar el tratamiento presentaron cargas parasitarias < 10000 parásitos/106 células humanas en frotis/biopsia y < 1,0 parásitos/106 células mononucleares en sangre periférica. Adicionalmente, se determinaron diferencias significativas (P < 0,05) entre las cargas parasitarias de acuerdo con el seguimiento del tratamiento, especie infectante y resolución médica. El ACP explicó la varianza de los datos entre tipo de tratamiento y resolución médica al finalizar el mismo (KMO= 0,432 y Chi2= 55,28**). Se logró identificar las especies infectantes en el 79,4% de las muestras, con la mayor abundancia relativa de L. braziliensis 65,09%, seguida de L. panamensis 31,13%, L. naiffi reportada por primera vez en Colombia en dos pacientes (1,89%) y L. lindenbergi en un solo paciente (0,945%) notificado con LC en el municipio de Miraflores, Guaviare y L. infantum en un solo paciente (0,945%) notificado con LC en el municipio de Tumaco, Nariño. El análisis filogenético fue más consistente en HSP70 frente a MPI, mostrando cuatro clados fuertemente diferenciados en el primer caso. Se estimó una diversidad genética mayor en MPI que en HSP70. Según MPI, π > en L. braziliensis que en L. panamensis, mientras h > L. braziliensis frente a L. panamensis. Conclusiones: En conclusión, a través del seguimiento se demostró la eficacia de la cuantificación de la carga parasitaria para evaluar el pronóstico de la LC, así como de los tratamientos farmacéuticos mostrando una disminución significativa de la carga parasitaria. La distribución sugirió que L. braziliensis tiene una mayor abundancia, mientras que L. panamensis tiene una mayor dispersión. Las relaciones filogenéticas de especies de Leishmania en personal militar colombiano se estimaron con la confirmación de dos nuevas especies circulando sin reporte previo en el país y una especie sin antecedentes de LC en el Ejército Colombiano. Finalmente, L. braziliensis presentó una diversidad genética sustancial. Palabras claves: Leishmania spp., leishmaniasis cutánea, carga parasitaria, antimoniato de meglumina, isetionato de pentamidina, ADNk, HSP70, MPI, filogenética, diversidad genética, Ejército Nacional de Colombia.