Potencial antiproliferativo de un extracto de curuba Passiflora mollissima (Kunth) L.H. Bailey sobre un modelo de cultivo 3D tipo esferoide de células de cáncer oral
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2020
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Resumen
La curuba (Passiflora mollissima (Kunth) L. H. Bailey) ha mostrado tener efecto antiproliferativo y quimioprotector observado en variedad de células cultivadas en monocapa. Por otro lado, los esferoides tumorales presentan características muy similares a los tumores in vivo, por lo que han sido ampliamente utilizados en el tamizaje de nuevos compuestos con potencial antitumoral. En consecuencia, el objetivo del presente estudio fue evaluar el potencial antiproliferativo de un extracto de curuba (Passiflora mollissima (Kunth) L. H. Bailey) sobre un modelo de cultivo 3D tipo esferoide de células de cáncer oral. Para esto, se realizó la caracterización del cultivo tridimensional de células CAL 27 y se trató durante 72 h con tres concentraciones del extracto de curuba (10, 50 y 100µg/ml) empleando como control positivo el medicamento cisplatino a 20µM. Se determinó la viabilidad celular con el método de resazurina, así como los cambios morfológicos de los esferoides a partir del análisis de imágenes y tinción con hematoxilina y eosina. Se evaluó el efecto antiproliferativo mediante el ensayo clonogénico y el ensayo de doble tinción Hoechst/ Ioduro de propidio, además de la expresión de 6 genes relacionados con muerte celular y metástasis (HIF-1α, p53, BCL-2, BAX, CDH1 y MMP 9), así como la evaluación del efecto sobre las fases del ciclo celular. Los resultados mostraron un efecto antiproliferativo dosis dependiente del extracto de curuba, así como el aumento de la expresión génica de p53, HIF 1α y CDH1. Por último, el extracto de curuba detuvo principalmente las células en la fase G0/G1 y S del ciclo celular. En conclusión, el presente estudio es el primero en evidenciar que el extracto de P. mollisima inhibe el crecimiento y la proliferación de las células tumorales orales cultivadas en esferoides a través de la regulación positiva de genes involucrados en procesos de muerte celular y metástasis.
Descripción
Abstract
The Passiflora mollissima (Kunth) L. H. Bailey has demonstrated antiproliferative and the chemoprotective effects observed in a variety of cultured cells in monolayer. On the other hand, the tumor spheroid presents characteristics very similar to in vivo tumor, so it has been used widely in the screening of new compounds with antitumor potential. In consequence, the present investigation aimed to evaluate the antiproliferative potential of Passiflora mollissima (Kunth) L. H. Bailey extract regarding of 3D model kind spheroid of oral cancer cells. For this, it was made the characterization of tridimensional cells CAL 27 and was tried for 72 hours with three concentrations of banana passionfruit extract (10, 50 y 100 µg/ml) used as a positive control cisplatin drug a 20 µM. It was determined the cell viability with a resazurin method as well as the morphologic changes of spheroids from the analysis of images and staining with hematoxylin and eosin. It was evaluated the antiproliferative effect through the clonogenic assay and the double staining Hoechst/ propidium sludge in addition to the expression of six (6) gens related to cell death and metastasis (HIF-1α, p53, BCL-2, BAX, CDH1 y MMP 9) as well as the test of effect about the cell cycle. The results showed an antiproliferative effect dose depending on the banana passionfruit extract, just as the improvement of genetic expression of p53, HIF 1α y CDH1. Finally, the banana passionfruit extract principally stopped the cells in stage G0/G1 y S e of the cell cycle. In conclusion, the current study is the first to reveal that the P. mollisima extract inhibits the growth and proliferation of the oral tumor cells cultivated in spheroids through the positive regulation of gens evolved in the metastasis and cell death.
Palabras clave
Esferoides, Cultivo celular 3D, Passiflora mollissima, Cáncer oral, Extracto frutícola
Keywords
Spheroids, 3D Cell culture, Passiflora mollissima, Oral cancer, Fruit extract