Examinando por Autor "Delgado Tiria, Félix Giovanni"
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Ítem Análisis del efecto del Candesartán en la replicación in vitro del virus dengue en un modelo de potenciación de la infección mediado por anticuerpos(2022) Barreto Guevara, Luisa Valentina; Bermudez Romero, Erika Disnay; Delgado Tiria, Félix Giovanni; Morantes Medina, Sandra Johanna; Bermudez Romero, Erika Disnay [0000-0001-9455-815X]; Barreto Guevara, Luisa Valentina [0000-0002-3188-3155]Dengue is an arthropod-borne viral infection and represents a public health problem in tropical and subtropical areas. As in many other Latin American countries, the Colombian population has been severely affected by dengue; in fact, approximately 2.0% of reported dengue cases in the Americas occur in Colombia [1]. Dengue results from infection by one of four virus serotypes: DENV-1, DENV-2, DENV-3 and DENV-4. This virus belongs to the Flaviviridae family and is transmitted to humans through the bite of Aedes aegypti mosquitoes. The clinical manifestations of dengue vary from a mild flu-like syndrome to a more severe form of the disease (DHF or DSS) [2]. At present, there is no specific treatment for dengue, its therapeutic management is directed to the treatment of symptoms, however, dengue vaccine is available. Despite this, the existence of multiple serotypes of DENV and the underlying mechanism leading to DHF and DSS could seriously limit the overall efficacy of the vaccine and the health of patients [3]. Recently, Candesartan, an antihypertensive drug, has been shown to exert antiviral effects by inhibiting dengue and Zika virus replication in primary infection models. Due to the need for an effective treatment for dengue and considering the possible antiflavivirus effects of Candesartan, the present research work focused on the study of the effect of this drug on dengue virus replication in vitro in an antibody-mediated potentiation model of infection. For this purpose, the K562 cell line was used, which resembles conditions that allow the study of secondary infections, which are the main risk factor for the development of severe dengue. For this, the 4G2 antibody and the four serotypes of the virus were used, using analytical methods such as flow cytometry. The results obtained suggest that Candesartan possesses antiviral activity against the DENV-1 serotype, since a significant change in the percentage reduction of infection was observed when the five concentrations of Candesartan (5, 10, 20, 40 and 80 μM) were used.Ítem Efecto del extracto de trametes versicolor sobre el fenotipo y la función de células dendríticas humanas condicionadas con medios de células de carcinoma oral(2023-12) Carrillo Giraldo, Gustavo Alonso; Delgado Tiria, Félix Giovanni; Cardona Mendoza, AndrésEl microambiente tumoral (MAT) induce un estado disfuncional a las células dendríticas (CDs) afectando su maduración y su capacidad de activar linfocitos T (LTs), llevándolas a un estado tolerogénico pro-tumoral. El efecto inmunogénico del extracto de Trametes versicolor (eTv) ha sido evaluado en varios tipos de cáncer con resultados satisfactorios, sin embargo, su efecto en Cáncer Oral (CO) no ha sido evaluado. En este contexto se evaluó el efecto del eTv sobre el fenotipo y función de las CDs expuestas a un medio condicionado proveniente de un cultivo de esferoides de la línea celular SCC-090 (MC-ES). Metodología: CDs fueron expuestas a diferentes concentraciones de MC-ES y por citometría de flujo se analizaron los cambios de expresión en marcadores de maduración, fenotipo y regulación. Adicionalmente se evaluó su efecto en la función de las CDs midiendo secreción de citocinas solubles y su capacidad de activación y proliferación de LTs a través de citometría de flujo. Resultados: Se pudo observar en el grupo tratado con eTv un aumento del porcentaje de células CD83+ y CD80+, así como incremento en el nivel de expresión de CD83 y PD-L1 en superficie. Por otro lado, se observó en el grupo de CDs maduras (CDm) expuestas a MC-ES y tratadas con eTv, una clara tendencia a secretar menos IL-4 y a promover un aumento en la proliferación y activación de LTs disminuida por MC-ES. Los resultados obtenidos sugieren que el eTv tiene efectos inmunoestimulantes en las DCs.Ítem Evaluación del efecto del ácido valproico en la replicación in vitro del denv-2(2021) Silva Aguilera, Yenny Mauren; Delgado Tiria, Félix Giovanni; Morantes Medina, Sandra JohannaEl dengue es una enfermedad viral aguda, causada por el virus dengue y transmitida por el mosquito de género Aedes que causa más de 70.000 infecciones al año en Colombia. A la fecha, no existe una vacuna eficaz o tratamiento farmacológico para controlar la enfermedad, solamente se administra terapia sintomática. Por tal razón, es necesario realizar estudios en el laboratorio encaminados a buscar nuevas alternativas terapéuticas para mejorar la calidad de vida del paciente infectado. En este sentido, el presente trabajo se enfocó en el estudio del potencial efecto antiviral del ácido valproico (VPA), un fármaco que se usa comúnmente para el tratamiento de algunos trastornos de tipo neurológico y que también se ha descrito inhibe las histonas desacetilasas. Para esto, se analizó el efecto que tiene el VPA en células infectadas in vitro con DENV-2. Por citometría de flujo se evaluaron los cambios en los porcentajes de infección post tratamiento y por qRT-PCR se cuantificó los efectos sobre el número de copias virales. Los resultados mostraron que el VPA, además de causar una disminución en el porcentaje de células infectadas, también provoca una reducción significativa en el número de copias virales en las células tratadas. Este efecto fue observado bajo diferentes condiciones experimentales que incluyeron variaciones en MOI, concentración de fármaco y tiempo de exposición. En conclusión, la evidencia presentada en este trabajo sugiere fuertemente que el VPA podría considerarse una potencial alternativa terapéutica para el manejo de la enfermedad causada por la infección con DENV-2.Ítem Evaluación del efecto del ácido valproico en los niveles de colesterol celular durante la infección con virus dengue(2023) Gutiérrez Urrego, María Gabriela; Romero Méndez, Juliana; Soler Chipatecua, María Alejandra; Delgado Tiria, Félix Giovanni; Morantes Medina, Sandra JohannaLa enfermedad causada por el virus dengue es considerada como una problemática de salud pública sobre la cual, hasta el momento no se tiene un tratamiento antiviral farmacológico efectivo y por ende el manejo de los pacientes solo está enfocado al tratamiento de los síntomas, mediante analgésicos y antifebriles. El ácido valproico (VPA) es un fármaco antiepiléptico, sin embargo, se ha demostrado que presenta un efecto antiviral durante la infección con virus dengue, cuyo mecanismo exacto no ha sido descrito hasta el momento. No obstante, se ha sugerido una posible alteración en los niveles de colesterol celular tras el tratamiento con VPA, teniendo en cuenta que el colesterol es el lípido de membrana más importante y que puede facilitar la replicación viral del virus dengue al interior celular, lo cual ha sido reportado en estudios con fármacos reductores de colesterol como el ezetimibe, que presenta un efecto antiviral debido a la inhibición del receptor NPC1L1 encargado de la captación de colesterol extracelular. Con base en lo anterior, este proyecto tuvo como objetivo determinar el efecto de ácido valproico sobre los niveles de colesterol celular en un modelo in vitro de infección con el virus dengue. Para ello, se llevaron a cabo experimentos con células Huh7 enfocados en el uso del Amplex Red Cholesterol Assay kit con el que se estandarizó la cuantificación de colesterol intracelular estableciendo como condiciones estándar un tiempo de tratamiento con ezetimibe 25 μL de 48 horas y una preparación de la muestra con un factor de dilución de 1:2. Luego de ello, se cuantificó el colesterol en células infectadas con DENV-2 y tratadas con rangos de concentración de VPA entre 0.25 y 8 mM, teniendo un control positivo (ezetimibe 25 μM ) y un control negativo (células sin tratamiento). Adicionalmente, se cuantificó tanto la replicación viral como la expresión del gen NPC1L1 por medio de qRT-PCR, obteniendo como resultado una disminución del número de copias virales, una reducción de la concentración de colesterol intracelular y un aumento en la expresión del gen NPC1L1 después de los tratamientos con VPA. En conclusión, el estudio realizado evidencia el potencial antiviral del VPA para el tratamiento de la infección causada por el virus dengue, teniendo en cuenta que se observó una reducción en la concentración de colesterol durante el tratamiento con el fármaco a concentraciones de 4 y 8 mM en un tiempo de 48 horas, luego de la infección.Ítem Evaluación del potencial antiviral de dos extractos derivados de subproductos del cacao en un modelo de infección in vitro con virus chikungunya(2024-10) Daza Guzmán, Luisa Fernanda; Guitiérrez Álvarez, Luis Felipe; Delgado Tiria, Félix Giovanni; Morantes Medina, Sandra JohannaLa enfermedad causada por virus chikungunya (CHIKV) no cuenta con un tratamiento específico y sus síntomas se manejan principalmente con analgésicos y antiinflamatorios. Extractos derivados de subproductos del cacao (cacota / cascarilla), han mostrado actividad antioxidante en estudios previos. Considerando que existe una relación entre los niveles de estrés oxidativo y el título viral de diferentes agentes virales, en este trabajo se evaluó el posible efecto antiviral de estos extractos en un modelo de infección in vitro con CHIKV. Para esto, células Huh-7 fueron tratadas con diferentes concentraciones de los extractos evaluando citotoxicidad por resazurina, actividad antioxidante con DCFH-DA y la actividad antiviral por RT-qPCR. Los resultados mostraron que los extractos de cacota y cascarilla no afectan la viabilidad de las células Huh-7 en los tiempos (24, 48 y 72h) y el rango de concentraciones evaluadas (250 - 15.6 µg/mL). Interesantemente, ambos extractos mostraron un potencial antioxidante y antiviral al reducir los niveles de ROS en las células infectadas con CHIKV, tanto a las 12 como a las 24 h de exposición, así como la replicación viral, observándose una reducción del número de copias de ARN viral. En conclusión, los extractos de cacao mostraron un potencial antiviral, posiblemente asociado a la reducción de las ROS producidas durante la infección con CHIKV.Ítem Evaluación in vitro del fenotipo y perfil de citocinas en células dendríticas condicionadas con fibroblastos gingivales humanos retadas con Streptococcus sanguinis.(2023) Méndez Romero, Elmer Roberto; Cardona Mendoza, Andrés Felipe; Parra Ávila, Miguel Hernando; Delgado Tiria, Félix Giovanni; Lafaurie Villamil, Gloria Inés; Castillo Perdomo, Diana Marcela; Castillo Romero, Yormaris; Delgadillo Salgado, Nathaly Andrea; Méndez Romero, Elmer Roberto [0009-0004-7979-7012]Antecedentes: La mucosa oral se caracteriza por promover tolerancia inmunológica (TI) mediada por células dendríticas (DCs) hacia su microbiota para mantener la homeostasis tisular. Sin embargo, hasta el momento no se han identificado el o los microorganismos que inducen dicho proceso en la cavidad oral. El Streptococcus sanguinis es un posible candidato inducir una inmunomodulación en la mucosa oral por su papel en la salud. Objetivo: Evaluar in vitro el perfil de citocinas y el fenotipo efector y regulador inducido por Streptococcus sanguinis en células dendríticas condicionadas por fibroblastos gingivales. Métodos: En este estudio se aislaron y diferenciaron MonDCs, al sexto día de diferenciación, se condicionaron con medio de fibroblasto gingival humano (FGH), se estimularon con Streptococcus sanguinis y Porphyromonas gingivalis a MOI 5 y MOI 10 por 24 horas y se procedió a evaluar el fenotipo y perfil de citocinas a través de citometría de flujo. Resultados: Se obtuvo una alta expresión de CD83 en MonDCs en respuesta a P. gingivalis en comparación con los niveles obtenidos para S. sanguinis, así como altos niveles de citocinas proinflamatorias como TNF-α y bajos niveles de IL-10 en respuesta a P. gingivalis. En cambio, para S. sanguinis se obtuvo el efecto contrario. Conclusión: Los resultados de este trabajo sugieren que la respuesta de las MonDCs a S. sanguinis es menos pro-inflamatoria que a P. gingivalis, y que los sobrenadantes de las FGH juegan un papel clave en la respuesta diferencial entre estas bacterias.Ítem Implementación del ensayo de 2′,7′-Diclorodihidrofluoresceina diacetato (DCFH-DA) para la evaluación de estrés oxidativo intracelular en modelos in vitro de cáncer colorrectal y seno(2022) Ortiz Machuca, Diana Valentina; Ramirez Montenegro, David Felipe; Morantes Medina, Sandra Johanna; Delgado Tiria, Félix Giovanni; Ramirez Montenegro, David Felipe [0000-0002-1469-7377]; Ortiz Machuca, Diana Valentina [0000-0001-5982-1936]Las especies reactivas de oxígeno (ROS) son subproductos naturales del metabolismo oxidativo, y juegan un papel importante a nivel celular en la modulación de la homeostasis redox. El ensayo de 2'-7'-Diclorofluoresceina diacetato (DCFH-DA) es empleado con frecuencia para cuantificar la producción de ROS intracelular, por ser económico, sencillo y reproducible. El reactivo se encuentra en forma de éster, un compuesto relativamente polar y permeable a la membrana, que se hidroliza por las esterasas celulares para ser convertido en diclorodihidrofluoresceina (DCFH), un compuesto no fluorescente y polar, que será oxidado en presencia de las ROS, convirtiéndose a 2',7'-diclorofluoresceína (DCF), un producto altamente fluorescente que se acumula en la célula. Pese al amplio uso de este ensayo para determinar estrés oxidativo, se han reportado diferentes condiciones experimentales que condicionan una correcta cuantificación de ROS intracelular. Teniendo en cuenta esto, en este trabajo se establecieron las condiciones óptimas para inducir y cuantificar estrés oxidativo empleando el ensayo DCFH-DA. Como modelo de estudio se emplearon las líneas celulares MCF-7 y HT-29, evaluando el efecto de dos inductores de ROS (H2O2 y doxorrubicina). Por medio de fluorometría se evaluó el efecto de la concentración del inductor, el tiempo de reacción y el medio de disolución del ensayo. Los resultados obtenidos sugieren que el H2O2 es un mayor inductor de ROS en MCF-7, aumentando la producción de ROS 1,96 veces respecto al control después de 24 horas a 0,04 %v/v. Este mismo incremento se observó en HT-29 pero usando H2O2 a 0,16 %v/v, mostrando diferencias estadísticamente significativas respecto al control (Kruskal-Wallis post-hoc mann Whitney con un P< 0,05). Adicionalmente, se demostró que la cuantificación de ROS se ve afectada por la exposición a la luz, se debe usar PBS como medio de disolución y tiempos de reacción no mayores a 30 minutos. El ensayo se estandarizó para medir estrés oxidativo intracelular en ambas líneas celulares, obteniendo resultados reproducibles basados en la normalización por concentración de proteína. Finalmente, se estructuró un protocolo que será de gran utilidad para evaluar la actividad oxidante o prooxidante de sustancias exógenas en investigaciones que lo requieran, este protocolo también podrá ser empleado para el tamizaje in vitro de sustancias antioxidantes.