Evaluación del efecto del ácido valproico en los niveles de colesterol celular durante la infección con virus dengue
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2023
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Resumen
La enfermedad causada por el virus dengue es considerada como una problemática de salud pública sobre la cual, hasta el momento no se tiene un tratamiento antiviral farmacológico efectivo y por ende el manejo de los pacientes solo está enfocado al tratamiento de los síntomas, mediante analgésicos y antifebriles. El ácido valproico (VPA) es un fármaco antiepiléptico, sin embargo, se ha demostrado que presenta un efecto antiviral durante la infección con virus dengue, cuyo mecanismo exacto no ha sido descrito hasta el momento. No obstante, se ha sugerido una posible alteración en los niveles de colesterol celular tras el tratamiento con VPA, teniendo en cuenta que el colesterol es el lípido de membrana más importante y que puede facilitar la replicación viral del virus dengue al interior celular, lo cual ha sido reportado en estudios con fármacos reductores de colesterol como el ezetimibe, que presenta un efecto antiviral debido a la inhibición del receptor NPC1L1 encargado de la captación de colesterol extracelular. Con base en lo anterior, este proyecto tuvo como objetivo determinar el efecto de ácido valproico sobre los niveles de colesterol celular en un modelo in vitro de infección con el virus dengue. Para ello, se llevaron a cabo experimentos con células Huh7 enfocados en el uso del Amplex Red Cholesterol Assay kit con el que se estandarizó la cuantificación de colesterol intracelular estableciendo como condiciones estándar un tiempo de tratamiento con ezetimibe 25 μL de 48 horas y una preparación de la muestra con un factor de dilución de 1:2. Luego de ello, se cuantificó el colesterol en células infectadas con DENV-2 y tratadas con rangos de concentración de VPA entre 0.25 y 8 mM, teniendo un control positivo (ezetimibe 25 μM ) y un control negativo (células sin tratamiento). Adicionalmente, se cuantificó tanto la replicación viral como la expresión del gen NPC1L1 por medio de qRT-PCR, obteniendo como resultado una disminución del número de copias virales, una reducción de la concentración de colesterol intracelular y un aumento en la expresión del gen NPC1L1 después de los tratamientos con VPA. En conclusión, el estudio realizado evidencia el potencial antiviral del VPA para el tratamiento de la infección causada por el virus dengue, teniendo en cuenta que se observó una reducción en la concentración de colesterol durante el tratamiento con el fármaco a concentraciones de 4 y 8 mM en un tiempo de 48 horas, luego de la infección.
Descripción
Abstract
The disease caused by the dengue virus is considered a public health problem for which, until now, there is no effective antiviral pharmacological treatment and therefore the management of patients is only focused on the treatment of symptoms, through analgesics and fever reducers Valproic acid (VPA) is an antiepileptic drug, however, it has been shown to have an antiviral effect during dengue virus infection, the exact mechanism of which has not been described so far. However, a possible alteration in cellular cholesterol levels has been suggested after treatment with VPA, taking into account that cholesterol is the most important membrane lipid and that it can facilitate viral replication of the dengue virus inside the cell, which It has been reported in studies with cholesterol-lowering drugs such as ezetimibe, which has an antiviral effect due to the inhibition of the NPC1L1 receptor responsible for uptake of extracellular cholesterol. Based on the above, this project aimed to determine the effect of valproic acid on cellular cholesterol levels in an in vitro model of dengue virus infection. For this, experiments were carried out with Huh7 cells focused on the use of the Amplex Red Cholesterol Assay kit, with which the quantification of intracellular cholesterol was standardized, establishing as standard conditions a treatment time of 48 hours with ezetimibe 25 μL and a preparation of the sample with a dilution factor of 1:2. After that, cholesterol was quantified in cells infected with DENV-2 and treated with VPA concentration ranges between 0.25 and 8 mM, having a positive control (ezetimibe 25 μM) and a negative control (cells without treatment). Additionally, both viral replication and the expression of the NPC1L1 gene were quantified by means of qRT-PCR, obtaining as a result a decrease in the number of viral copies, a reduction in the concentration of intracellular cholesterol and an increase in the expression of the NPC1L1 gene after of VPA treatments. In conclusion, the study carried out shows the antiviral potential of VPA for the treatment of infection caused by dengue virus, taking into account that a reduction in cholesterol concentration was observed during treatment with the drug at concentrations of 4 and 8 mM within 48 hours after infection.
Palabras clave
Dengue, VPA, Colesterol, Ezetimibe, NPC1L1, Huh7
Keywords
Dengue, VPA, Cholesterol, Ezetimibe, NPC1L1, Huh7