Examinando por Autor "Delgado Tiria, Felix Giovanni"
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Ítem Asociación entre polimorfismos de los genes DC-SIGN, TNF-α y FcγRiia y la susceptibilidad a la infección por dengue(2017) Parra Alvarez, Shirly Julieth; Coronel Ruiz, Carolina; Delgado Tiria, Felix GiovanniEl dengue es una arbovirosis ampliamente distribuida en países tropicales y subtropicales, la cual es transmitida por artrópodos del genero Aedes. La infección puede cursar de forma asintomática o presentar un amplio espectro de manifestaciones clínicas que pueden tener un desenlace fatal. Las características genéticas del hospedero pueden influenciar su respuesta inmunológica y por tanto la susceptibilidad a la infección y la severidad de la enfermedad. El presente estudio estableció la relación de los polimorfismos de nucleótido simple (SNPs) en los genes DC-SIGN (rs4804803), FcγRIIa (rs1801274) y TNF-α (rs1800629) con la infección por dengue en niños entre 4 y 14 años residentes en una zona endémica de Colombia. Se analizaron 230 muestras de los municipios de Anapoima, Apulo y Girardot del departamento de Cundinamarca, las cuales se caracterizaron por serología y detección de ARN viral. Lo anterior permitió la selección de tres grupos de estudio: el grupo control (n=37), el grupo de infecciones asintomáticas (n=138) y el grupo de infecciones sintomáticas (n=55) conformado por pacientes con DCSA (n=48) y DG (n=7) Los tres SNPs cumplieron el equilibrio de Hardy-Weinberg, la presencia del SNP para DC-SIGN, no presentó asociación con la susceptibilidad a la infección o la enfermedad. El SNP del gen FcγRIIa, se identificó como factor protector en el grupo de infecciones asintomáticas respecto al grupo control (OR=0.51, p=0.010), y como factor de riesgo al comparar el grupo de infección sintomática respecto a las asintomáticas (OR=1.73, p=0.018). La presencia del SNP del TNF-α (rs1800629), se relacionó como factor de riesgo al comparar tanto las infecciones asintomáticas como sintomáticas con el grupo control OR=4.60 (p=<0.0001) y OR=2.95 (p=0.003), respectivamente. Se identificaron 17 combinaciones genotípicas, en el grupo control se encontró con mayor frecuencia la presencia de un SNP, a diferencia de los grupos de infección en los que se observaron dos o los tres SNPs. La combinación de los SNPs DC-SIGN y FcγRIIa se asoció con protección a la infección por DENV (OR=0.21, p=0.028). Por el contrario, la presencia conjunta de los polimorfismos en DC-SIGN y TNF-α se asoció como factor de riesgo para desarrollar síntomas durante la infección por DENV (OR=12.92, p=0.0005). Estos resultados muestran la asociación entre la presencia de los polimorfismos en los tres genes evaluados y la suceptibilidad a la infeccion.Ítem Caracterización celular y funcional de macrófagos humanos polarizados infectados con el virus de Chikungunya(2022) Pinzón Burgos, Eduar Fernando; Delgado Tiria, Felix Giovanni; Calvo Tapiero, Eliana Patricia; Pinzón Burgos, Eduar Fernando [0000-0002-4521-143X]Durante el año 2015 según un informe del Instituto Nacional de Salud (INS), los casos reportados por infección con el virus del Chikungunya (CHIKV) en el país superaron los 100.000, convirtiéndose en un grave problema de salud pública. Aunque en años recientes la tasa de infección ha disminuido considerablemente, es una enfermedad de presencia constante entre la población colombiana alcanzado el centenar de casos confirmados para el año 2021, según datos del INS. A la fecha, se ha descrito que el papel de los macrófagos en la infección por CHIKV no solo se suscribe a uno puramente efector en la fase aguda de la enfermedad, sino que también se ha evidenciado su importancia en la cronicidad de algunos escenarios clínicos secundarios a la infección como la artritis y el daño a algunos órganos. En esta investigación se demostró que CHIKV es capaz de infectar macrófagos polarizados humanos afectando el perfil de expresión y producción de proteínas, un hecho interesante es que el perfil de susceptibilidad a la infección parece variar entre los grupos de comparación (macrófagos M0, M1 y M2). A través de los ensayos de plaqueo, citometría de flujo y RT-qPCR se determinó que existen diferencias en los patrones de infección para la diferentes sub poblaciones, siendo M2 y M0 más susceptibles a la infección que los macrófagos M1. De igual forma, se demostró a través del análisis de la expresión génica que macrófagos polarizados e infectados con CHIKV sobre regulan la expresión de proteínas y citocinas pro inflamatorias sin importar su origen de polarización, este hallazgo se mantuvo al realizar el análisis de las proteínas liberadas al sobrenadante, lo que permite establecer una relación directa entre la infección con CHIKV y la activación de vías de señalización celular que promuevan el sostenimiento de un micro ambiente celular pro inflamatorio. Los hallazgos encontrados permiten establecer una posible relación entre la infección de macrófagos con CHIKV y su posible efecto en la creación y mantenimiento de un ambiente marcadamente pro inflamatorio, como el que se describe en algunas patologías crónicas secundarias a la primoinfección con el virus.Ítem Descripción de un modelo de infección in vitro con virus dengue empleando células mononucleares humanas de sangre periférica(Universidad de Antioquia, 2014) Castellanos, Jaime; Delgado Tiria, Felix Giovanni; Pérez Acosta, Adriana Marisol; Castellanos, Jaime [0000-0003-1596-8383]; Delgado Tiria, Felix Giovanni [0000-0001-6685-7507]; Delgado Tiria, Felix Giovanni [0000-0001-6685-7507]No existen modelos animales apropiados para el estudio de la fisiopatología y las manifestacio- nes clínicas de la enfermedad causada por la infección con virus dengue, por lo que para ello se requiere desarrollar modelos experimentales. El propósito del presente trabajo fue establecer un modelo de infección in vitro con virus dengue serotipo-2 (DENV-2). Para esto se obtuvieron células mononucleares de sangre periférica (CMSP) usando un gradiente de Ficoll, y se las culti- vó e infectó con DENV-2 a una baja multiplicidad de infección. La subpoblación celular que se infectó y produjo citocinas se identificó empleando un análisis multiparamétrico por citometría de flujo. Como resultado, las CMSP fueron permisivas a la infección, que se detectó a las 24 horas de inoculado el virus. Además, en este mismo tiempo, los monocitos CD14+, pero no los linfo- citos CD3+ o CD19+, fueron la subpoblación celular preferencialmente infectada y responsable de la producción de TNF-α e IL-6. En conclusión, se estableció un modelo de infección in vitro usando CMSP no fraccionadas, en el que se identificó a los monocitos CD14+ como la principal célula blanco de la infección con DENV-2 y productora de citocinas proinflamatorias.Ítem Estandarización de una metodología para la cuantificación de títulos virales por citometría de flujo: virus dengue y zika(Universidad El Bosque) Almanza Holguín, Laura Natalia; Duque Varela, Juan Pablo; Delgado Tiria, Felix Giovanni; Delgado Tiria, Felix Giovanni [0000-0001-6685-7507]The basic research in virology has a Standard Gold methodology for the calculation of viral titer which is the plating technique. However, this technique requires a wide availability of time and experiences by the experimenter; Therefore, proposing an alternative and equally reliable technique is a challenge that currently exists. For this reason, this project aims to statistically compare the results obtained between the traditional method and flow cytometry to see if it is feasible to use the latter as a routine technique in the quantification of viral loads. For this, three different cell lines (VERO, BHK-21 and U937-DC-SIGN) and the dengue (4 serotypes) and Zika viruses were used in a new protocol for flow cytometry which is based on the use of 2-fold serial dilutions of viral inoculum in order to obtain percentages of infected cells and then calculate the viral titers. The results obtained by flow cytometry were compared with those previously obtained by plaque assay, applying a correlation analysis. As a result, it was evident that the viral titers calculated using the BHK-21 cells correlated significantly with those reported by the plaque assay. Additionally, it was observed that the infectivity curves were different between the different cell lines used, showing different degrees of susceptibility to infection at the time of the test. In conclusion, our results show that the flow cytometry technique can be used as an alternative method for the quantification of viral particles, obtaining results that correlate with those obtained by plating, as long as BHK-21 cells are used.Ítem Estudio del potencial antiviral de la niclosamida en líneas celulares neuronales infectadas con el virus Zika(2022) López Ardila, Laura Karina; Delgado Tiria, Felix Giovanni; Sandra Johanna, Morantes Medina; Lopez Ardila, Laura Karina [0000-0001-9017-0386]El virus del Zika (ZIKV) es un arbovirus que se transmite por medio de la picadura de Aedes aegypti o Aedes albopictus, según la actualización epidemiológica propuesta por la Organización Panamericana de la Salud para 2021, se notifican 728.831 casos asociados a arbovirus, concentrándose en Colombia en zonas endémicas como Guainía, Caquetá, Arauca, Chocó, Huila y el archipiélago de San Andrés. El virus del Zika está asociado a enfermedades congénitas como la microcefalia, el síndrome de Guillain-Barré y otras patologías que implican una atenuación en el desarrollo y crecimiento neuronal del feto. En este trabajo, se evalúa a nivel in vitro el efecto antiviral del fármaco antihelmíntico niclosamida sobre la línea SH-SY5Y, una línea celular susceptible a la infección por el virus del Zika. La niclosamida por su parte, es un fármaco que pertenece a la categoría B de la clasificación del riesgo al feto propuesta por la FDA, lo que sugiere seguridad ante citotoxicidad congénita. Para esto, el proyecto se ejecutó en cuatro fases, en la primera se obtuvo un cultivo estable de la línea celular SH-SY5Y, en la segunda se realizaron pruebas de citotoxicidad con el fármaco niclosamida para seleccionar el rango adecuado de concentraciones a trabajar, en la tercera fase se llevó a cabo la infección celular con el fin de establecer la dilución de virus que no afecte la viabilidad de las células y al mismo tiempo obtener el nivel de infección adecuado. En la última fase, se evaluó el efecto de la niclosamida con nueve concentraciones entre 10uM y 0.039uM sobre los porcentajes de infección mediante citometría de flujo. Finalmente, es posible evidenciar una disminución en el porcentaje de infección luego de los tres esquemas de tratamiento con niclosamida, además de demostrar un porcentaje significativo de reducción en la infección con ZIKV posterior al tratamiento pre-infección con las concentraciones más altas de niclosamida. En conclusión, el estudio sugiere que la niclosamida presenta potencial antiviral siempre y cuando se cumplan ciertas condiciones experimentales como infección celular con ZIKV dilución ½, y tiempo de tratamiento no mayor a 24 horas.Ítem Evaluación del papel inmunoregulador de sST2 en células mononucleares de sangre periférica durante la infección ex vivo con virus denguePérez Acosta, Adriana Marisol; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Delgado Tiria, Felix GiovanniEl dengue grave se caracteriza por altos niveles de citocinas como TNFα e IL-6, que pueden inducir aumento en la permeabilidad vascular, debido específicamente a un efecto pro-inflamatorio/vasodilatador sobre las células del endotelio vascular. Recientemente, se ha reportado que pacientes con dengue presentan niveles elevados de la isoforma soluble de ST2 (sST2) en el suero, sugiriendo que esta proteína podría jugar un papel importante durante la inmunopatogénesis de la enfermedad. Por otro lado, se ha reportado que sST2, un miembro de la familia de receptores de IL-1, inhibe la producción de citocinas proinflamatorias en macrófagos estimulados con lipopolisacárido (LPS). El presente trabajo tuvo como propósito establecer un modelo de infección in vitro, empleando células mononucleares de sangre periférica (CMSP) no fraccionadas infectadas con virus dengue serotipo 2 (DENV-2), que permitiera identificar la célula diana permisiva a la infección con el virus y aquellas células responsables de la producción de TNFα e IL-6, para así evaluar efecto de la proteína recombinante sST2-Fc sobre la producción de estas citocinas proinflamatorias. Como resultado, se encontró que las CMSP fueron permisivas a la infección y los monocitos CD14+, pero no linfocitos CD3+ o CD19+, fue la subpoblación celular preferencialmente infectada y responsable de la producción de TNFα e IL-6. Adicionalmente, las CMSP infectadas no produjeron sST2. Finalmente, la proteína recombinante sST2-Fc ejerció su efecto imunoregulador a una concentracion 10µg/mL sobre monocitos estimulados con LPS por 12 horas, pero este efecto no fue observado cuando los monocitos fueron infectados con DENV-2. Estos resultados podrían sugerir que la proteína sST2 no juega un papel en la regulación de la respuesta inmune durante la infección con DENV y que por el contrario, podría participar en el desarrollo del dengue grave.Ítem Immune responses to dengue and Zika viruses—Guidance for T cell vaccine development(Multidisciplinary Digital Publishing Institute, 2018) Roth, Claude; Simon Lorière, Etienne; Sakuntabhai, Anavaj; Delgado Tiria, Felix Giovanni; Delgado Tiria, Felix Giovanni [0000-0001-6685-7507]; Delgado Tiria, Felix Giovanni [0000-0001-6685-7507]Ítem Improved Immune Responses Against Zika Virus After Sequential Dengue and Zika Virus Infection in Humans(MDPI, 2018) Delgado Tiria, Felix Giovanni; Torres, Karina I.; Castellanos, Jaime; Romero-Sánchez, Consuelo; Simon Lorière, Etienne; Sakuntabhai, Anavaj; Roth, Claude; Castellanos, Jaime [0000-0003-1596-8383]; Romero-Sánchez, Consuelo [0000-0002-6973-7639]; Delgado Tiria, Felix Giovanni [0000-0001-6685-7507]; Delgado Tiria, Felix Giovanni [0000-0001-6685-7507]Ítem Método de cuantificación automática de células fijadas y marcadas con sustrato cromogénico para la determinación de títulos de anticuerpos neutralizantes contra virus dengue por medio de visión artificial(2020) Ardila Patiño, Geraldine; Farfán Pinilla, Andrés Felipe; Delgado Tiria, Felix Giovanni; Avendaño Pérez, JonathanActualmente para evaluar la presencia de anticuerpos neutralizantes (NAbs) inducidos por infección con virus Dengue, en muestras de suero de individuos donantes de sangre, se realizan dos pruebas: PRNT y Citometría de flujo, las cuales tienen la finalidad de obtener el valor del título de neutralización 50 (NEUT50) para el donante. Sin embargo, al ser pruebas biológicas, requieren de personal experto para realizar el procedimiento, además de equipos, materiales y softwares de alto costo, teniendo en cuenta que en algunas de estas pruebas se debe realizar cuantificación de forma visual incrementando la probabilidad de presentar mayor porcentaje de errores humanos, generando así que el estudio tarde mayor tiempo. El objetivo de esta investigación es presentar un método alterno de cuantificación automática de células fijadas y marcadas con sustrato cromogénico para la determinación de títulos de anticuerpos neutralizantes contra virus Dengue por medio de visión de máquina, con el fin de usarse como herramienta de apoyo para el personal del laboratorio de Virología de la Universidad El Bosque.