Examinando por Autor "Castellanos Parra, Jaime Eduardo"
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Ítem Análisis del riesgo en la seguridad transfusional debido a la circulación de arbovirus en Colombia(2024-01) Cáceres Munar, Brian Alejandro; Delgado Tiria, Félix Giovanni; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Urbina Bonilla, Adriana Del Pilar; Cáceres Munar, Brian Alejandro [https://orcid.org/0000-0003-2961-6856]En la actualidad, es claro que el principal mecanismo de transmisión arbovirus como dengue (DENV), Zika (ZIKV) y chikungunya (CHIKV) ocurre a través de la picadura de mosquitos hematófagos del género Aedes infectados, sin embargo, los altos porcentajes de infecciones asintomáticas y las elevadas viremias que éstas pueden desarrollar son factores que pueden contribuir a que estos virus se transmitan a través de otras vías alternativas, entre estas, la transmisión por transfusión sanguínea. En este sentido, el presente estudio tuvo por objetivo evaluar el riesgo en la seguridad transfusional que representan los arbovirus en donantes de sangre (DS) en Colombia, para esto, en el marco de un estudio analítico transversal se compararon las prevalencias, tasas de incidencia y riesgos residuales de infecciones por DENV ZIKV, CHIKV y coinfecciones en DS, obtenidas durante un periodo endémico (2021-2022, n=1.119) y un brote de dengue (2018-2019, n=462), adicionalmente, se evaluó la estabilidad de DENV, ZIKV y CHIKV en plaquetas y glóbulos rojos almacenados bajo condiciones estándar de banco de sangre. Las prevalencias de arbovirus en DS, representaron el 25,1% y el 5,3% en el brote y el periodo endémico de dengue respectivamente (p <0,05), en el brote la prevalencia más alta se observó en DENV (14,5%) mientras que el periodo endémico, la prevalencia más alta se observó en CHIKV (3,3%), las tasas de incidencia de arbovirus representaron hasta 104,4 y 6,4 donantes positivos por cada mil donantes-mes en brotes y periodos endémicos de dengue respectivamente, mientras que el riesgo residual de arbovirus representó hasta 24,3 y 1,5 donaciones positivas por cada mil donaciones en brotes y periodos endémicos de dengue respectivamente. Por otro lado, se confirmó la estabilidad del genoma viral de DENV, ZIKV y CHIKV, además de la capacidad infecciosa de CHIKV en plaquetas almacenadas bajo condiciones estándar de banco de sangre durante 6 días. En conclusión, estos resultados sugieren que los arbovirus pueden respetar un riesgo para la seguridad transfusional en el país, especialmente en periodos de brote de estos virus, sin embargo, se necesitan más estudios dirigidos no solo al estudio de los DS, también al estudio de los receptores de estas transfusiones potencialmente infecciosas para comprender con más detalle el impacto que pueden generar las infecciones arbovirales en la seguridad transfusional del país.Ítem Caracterización clínica, histológica y microbiológica de caries dental radicular en personas adultas mayores(2022) Úsuga Vacca, Margarita Viviana; Martignon Biermann, Stefania; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Ricaurte Alejandro, Márquez Ortiz; Martínez-Mier, Esperanza Ángeles; Velandia Romero, Myriam Lucía; Usuga Vacca, Margarita Viviana [0000-0003-2292-037X]El objetivo de este estudio fue determinar, para caries radicular, características operativas de métodos diagnósticos (Estudio-1); de asociación comportamental/clínico-patológica, (Estudio-2), y microbiológicas (Estudio-3). Estudio-1. Métodos diagnósticos valorados secuencialmente (1 examinador; n=125 superficies radiculares dentales): ICDAS (Sano-n=20; Caries-Inicial-n=49; Caries-Moderada-n=36; Caries-Severa-n=20); Óptico: Fluorescencia-cuantitativa-inducida-luz (QLF) (pérdida: Profundidad-∆F-%;); Histológicos: Microtomografía-computarizada (Micro-CT) (nsubmuestra-superficies=24); en secciones transversales (80-120 μm; n=140): Microscopía-de-luz-polarizada (PLM) y Estereomicroscopía (E) (ICDAS-radicular-histológico: ausencia, tercio-externo/-medio/-interno). Entre métodos (exceptuando QLF): Concordancia substancial-casi perfecta (Kappa: 0.62-0.98), con sensibilidad/especificidad altas (0.6-0.96/0.92-0.93) para ICDAS frente a pruebas histológicas; QLF vs. demás: concordancia muy-baja-débil (0.14-0.17) y baja exactitud (área-bajo-curva-ROC: <0.71, en los mejores puntos de corte). Estudio-2. Tres examinadores valoraron 226 adultos mayores institucionalizados (Bogotá): ICDAS-Activas/Inactivas, obturaciones, riesgo (Cariogram®), características individuales (cuestionario: demografía; antecedentes sistémicos; dentaduras; conocimientos/prácticas y calidad-de-vida-GOHAI). Edad promedio: 80.1±9.3 años (mujeres: 63.7%); prevalencias de: ICR (Índice-de-Caries-Radicular): 49.1%, ICDAS+obturaciones: 46% (2.03±2.78 superficies promedio), ICDAS-Activa: 40.3%, afección-sistémica: 94.2%; cuidado-oral-asistido: 58%. Asociación significativa (modelos-multivariados; p<0.05): caries-radicular/caries-radicular-activa vs. caries-coronal, hombre, >14 dientes, raíces-expuestas, ≥25g azúcares/día y <2 cepillados/día; asociación intermedia (análisis-de-componentes-principales; p<0.05) en presencia de caries activa: calidad-de-vida vs. prácticas-de-cuidado y motivo-de-consulta. Estudio-3. Se identificó microbioma de biopelícula radicular (n=42 participantes Estudio-2: n=130; Sana-n=45; Caries-Iniciales-Activas-n=18; Caries-Inicial-Inactiva-n=23; Caries-Moderada/Extensa-Activa-n=42; Caries-Moderada-Inactiva-n=2). Se amplificó, secuenció (Illumina-MiSeq) y analizó región V4-16S-rARN para identificación del microbioma. Asignación taxonómica ASVs (>1% abundancia, base-de-datos HOMD), análisis de diversidad (riqueza, índices Simpson/Shannon; Kruskal-Wallis; p<0.05): 5269 (género: 19; especie: 343), >Sano vs. Caries (2; p<0.05). El microbioma central fue altamente abundante en géneros: Streptococcus, Leptotrichia, Fusobacterium, Prevotella, Veillonella, Selenomonas; mayor riqueza de especies en sanos (p<0.05); mayor abundancia relativa de especies: Sano: Porfiromona pasteri, Lechtotricia wadei, Cardiobacterium valvarum y Campylobacter gracilis; Caries-Cavitacionales: Prevotella denticola y Caries-Activas: Prevotella denticola, Leptotrichia s.p. y Lactobacillus. Conclusiones: Para caries radicular, se validó ICDAS visual, frente a histogía; adultos mayores institucionalizados de Bogotá mostraron alta carga de caries y compleja composición microbiana de su biopelícula.Ítem Comparación del contenido proteico del esmalte de dientes permanentes sanos y con fluorosis(2014) Castiblanco Rubio, Gina Alejandra; Mejía Naranjo, Wilson Alfonso; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Martignon, StefaniaEl esmalte con fluorosis es menos mineralizado y más poroso que el esmalte sano y durante el desarrollo retiene mayor contenido proteico. La evidencia en esmalte fluorótico erupcionado es contradictoria y no se conoce (en comparación al esmalte sano) si tiene mayor abundancia de péptidos, sus características, ni las proteínas de las que provienen. Identificar y comparar el material proteico del esmalte dental erupcionado sano y con fluorosis moderada usando Cromatografía Líquida acoplada a Espectrometría de Masas en Tándem (LC-MS/MS). Se estandarizó el protocolo de extracción de proteínas con TCA. Se obtuvo el extracto proteico del esmalte de 8 molares sanos (n=4) y con fluorosis dental moderada (n=4). Sin digestión previa con tripsina, se analizaron con LC-MS/MS y se utilizó la base de datos de SwissProt usando Mascot 2.3. Se consideraron identificaciones con puntaje ≥24 y se elaboró un listado con los péptidos de AMELX comunes a todas las muestras (puntaje ≥10), se determinó su abundancia relativa y se comparó entre los grupos (sano/fluorosis) con la prueba t-Student. Los sitios naturales de corte se compararon con los reportados en la literatura. Se predijo la estructura terciaria de la amelogenina con el servidor I-Tasser y la cuaternaria con Z-DOCK. Las imágenes se editaron en Pymol. Se identificaron tres proteínas específicas del esmalte: AMELX/Y, AMBN y ENAM, estas dos últimas se reportan por primera vez en esmalte erupcionado. Mientras que AMEL se identificó en todas las muestras, ENAM se encontró solo en el 50% de los dientes fluoróticos. Se obtuvieron las secuencias de 19 péptidos de AMELX comunes a los dos tipos de esmalte que mostraron sitios de clivaje previamente reportados para MMP-20 y KLK-4; tienen de 8 a 18 residuos, masas moleculares menores a 2 kDa, provienen en su mayoría de la región N-terminal y se ubican internamente en nuestra predicción de la estructura terciaria y cuaternaria de AMELX. No encontramos diferencias significativas en la abundancia relativa de los péptidos de los dos tipos de esmalte. Con estos resultados sugerimos un posible papel de ENAM en la patogénesis de la fluorosis dental y soportamos la hipótesis de que en la fluorosis se presenta retraso en el corte de amelogenina y no retención permanente de sus péptidos en el esmalte erupcionado.Ítem Dengue con manifestaciones neurológicas: un reporte de casos(2018) Esteban Nieto, Paula Andrea; Panqueba Salgado, Juanita; Pastrana Tovar, Valentina; Benavides del Castillo, Daniela; Castellanos Parra, Jaime EduardoIntroducción: La enfermedad grave por dengue se diagnostica por fuga plasmática severa, hemorragias, o afectación grave del hígado, cerebro o corazón. Colombia es un país hiperendémico con cifras sostenidas de transmisión y enfermedad, sobre todo en menores de 15 años. El objetivo de este trabajo es describir la enfermedad neurológica asociada a dengue en niños del Huila. Métodos: Se estudiaron retrospectivamente 11 pacientes pediátricos con signos de enfermedad febril compatible con dengue y con signos neurológicos que consultaron al Hospital Universitario de Neiva entre marzo de 2011 y julio de 2012. Además de los laboratorios de rutina, se analizaron la citoquímica de LCR y las imágenes diagnósticas para documentar los casos. La infección por dengue se confirmó por serología de IgM e IgG y RT-PCR. Resultados: Se detectó RNA viral en todos los sueros, aunque solo se tipificó DENV-1 en tres, nueve fueron infecciones primarias (IgM positivos). Convulsiones tónico-clónicas (73%), alteración del estado de conciencia (27%), irritabilidad (27%) y ataxia (18%) fueron los signos neurológicos más frecuentes. En ninguno se presentó fuga plasmática, choque o compromiso hepático, confirmando el diagnóstico de encefalitis viral. En las 8 TAC, 3 radiografías de tórax y una resonancia analizados no hubo hallazgos anormales; tampoco se evidenció infección bacteriana o fúngica en el LCR. Ninguno de los individuos falleció. Conclusiones: Se describe por primera vez en Colombia que los signos neurológicos pueden aparecer como parte de la enfermedad grave por dengue, por lo que debe ser incluido dentro de los diagnósticos diferenciales en pacientes con clínica neurológica.Ítem Desgaste dental erosivo y su relación con factores de riesgo, estado de salud dental, composición de saliva y biopelícula(2022) Avila Adarme, Leidy Viviana; Martignon Biermann, Stefania; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Avila Adarme, Leidy Viviana [0000-0003-1545-4219]Este estudio caracterizó en adolescentes colombianos, el desgaste dental erosivo (ETW), su riesgo y la composición proteica en saliva y microbiológica de biopelícula. Bajo aval ético, examinadores calibrados (reproducibilidad inter-/intra-examinador: Kappa-ponderado≥0.70) valoraron, en escolarizados (12-15 años) de Usaquén-Bogotá, presencia/severidad de ETW (BEWE-Máximo: mayor código, 0-3; BEWE-Total: suma del mayor código/sextante, 0-18), y riesgo de ETW (cuestionario). En una segunda parte, en tres subgrupos de individuos Sanos (G-S: n=10), con ETW (G-ETW: n=13) o, Caries severa-CS (G-C: n=10), se analizaron muestras de: -película adquirida y saliva para conocer composición proteica (LC-MS/MS, Western-Blot-WB, ELISA), biopelícula (composición bacteriana, rRNA-16S-Ilumina-miSeq). Se validó encuesta en contenido y constructo (AFE: KMO=0.68; Cronbach’s α=0.67; AFC: RMSEA=0.017; PRATIO=0.76), resultando en un instrumento de 24 ítems. Se valoró ETW y riesgo (n=454; edad promedio: 13.5±1.1 años; niñas: 61.7%). Prevalencia de ETW: 71.6%, BEWE-Máximo 3: 58.1%, BEWE-Total≤8: 84.3%; asociación multivariada (p<0.05) con cepillado antes de comer (ORa=3.98), CS (ORa=2.53), sexo masculino (ORa=2.53) y ≥14 años (ORa=1.83). Análisis de proteómica mostraron abundancia relativa diferencial de proteínas (t-Student, p<0.05) en G-ETW vs. G-S: sobre-reguladas (Antilecuporteasa, Histatina y Proteina-inducida-por-prolactina) y sub-reguladas (Hemoglobina-Beta, Defensina-1). WB: Cistatina, MUC5B, Antilecuproteasa y Defensina-1 (menor detección) en película adquirida y saliva donde fue más fácil detectar estas proteínas; ELISA: detección de proteínas-ricas-en-prolina con menores concentraciones promedio en saliva de G-S vs. G-C (U-Mann-Whitney, p<0.05). Composición bacteriana: mayor riqueza asociada a G-S; mayor abundancia relativa de ocho especies periodontalmente relevantes en G-ETW vs. G-S y en G-C vs. G-S: mayor abundancia relativa de siete especies sacarolíticas; G-S: mayor abundancia relativa de bacterias de la microbiota residente en ambas comparaciones. Adolescentes bogotanos presentaron alta prevalencia de ETW con severidad leve, asociada con edad, sexo, caries y hábitos orales. Se lograron detectar diferencias estadísticamente significativas en la composición proteica/bacteriana en película adquirida, saliva y biopelícula dental de los individuos con ETW.Ítem Estrategia para la confirmación de casos de dengue, su clasificación y pronóstico: aportes de algunos marcadores serológicos y celulares(2023) Coronel Ruiz, Carolina; Velandia Romero, Myriam Lucía; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Coronel Ruiz, Carolina [0000-0003-2202-5682]Dengue es la arbovirosis humana de importancia en la salud pública en el mundo. La infección involucra la interacción de componentes del virus y factores del hospedero, los cuales se relacionan con un amplio espectro clínico que dificultan la identificación temprana de los casos. La infección induce variaciones en los niveles de algunas proteínas que pueden estar relacionados con el pronóstico y la severidad. Estos marcadores biológicos -o biomarcadores-, son moléculas liberadas por las células como citocinas, quimiocinas, anticuerpos, proteínas constitutivas de la membrana plasmática que pueden afectar la integridad de tejidos como el endotelio. En la patogénesis de dengue, se produce una respuesta caracterizada por la liberación de moléculas que tienen efecto en la activación de células, e inducen cambios en la arquitectura y función de diferentes tejidos. El endotelio representa el principal tejido afectado y cumple un papel esencial favoreciendo la adherencia, permeabilidad y activación de células inmunes. Su alteración ha sido estudiada en procesos inflamatorios sistémicos en los que se ha analizado el efecto de la proteína de alta movilidad del grupo 1 (HMGB1) en la activación y disfunción, y su relación con la severidad. El objetivo del estudio fue establecer una estrategia para la confirmación de casos de dengue y definir el aporte de algunos biomarcadores serológicos y celulares para su clasificación y pronóstico. Por lo tanto, el trabajo integró el estudio de tres componentes esenciales en la infección por DENV, en el primero se realizó el análisis de variables clínicas y de laboratorio para el diseño de un algoritmo diagnóstico en la confirmación de casos de dengue. El segundo integró la medición de marcadores biológicos en muestras de individuos febriles, para identificar su utilidad en el diagnóstico y el pronóstico; el tercer componente, se centró en la activación y disfunción del endotelio y la exploración del papel que desempeña la proteína HMGB1 liberada por PBMCs durante la infección por DENV. El primer componente del estudio analizó 505 muestras de individuos con síndrome febril agudo mediante la aplicación de pruebas de diagnóstico rápido (PDR) -IgM e IgG y NS1-, y pruebas de ELISA de captura -IgM, IgG y NS1-, y RT-PCR. Se identificó que la sensibilidad, especificidad, valores predictivos y área bajo la curva (AUC) de las PDR fue inferior respecto al estándar (ELISA IgM Positivo o PCR positivo) al igual que las pruebas de ELISA. El análisis basado en la combinación de dos pruebas, aumentó la sensibilidad y especificidad entre 35% hasta el 50%. La inclusión de variables clínicas y hematológicas en un análisis de regresión logística identificó su utilidad en el diagnóstico y la clasificación de los casos (DWoWS, DWS, SD) y febriles no dengue (OFI). Estas variables se consideraron en el diseño de árboles de decisión para determinar el porcentaje de confirmación de casos. El algoritmo que integró la combinación de PDR NS1 OR ELISA IgM con mialgias, dolor abdominal, plaquetas <140.000/mm3 detectó el 90.6% de los casos, mientras la combinación de PDR IgM OR PDR NS1 con variables clínicas y hematológicas, identificó el 81.6%. El primer algoritmo puede ser utilizado en instituciones de salud que cuentan con capacidad para su aplicación en el diagnóstico de rutina; mientras que el segundo, en instituciones de áreas endémicas por la combinación de pruebas accesibles y de bajo costo, que complementan la información clínica y permitiría realizar un diagnóstico y tratamiento oportuno. El segundo componente del trabajo se centró en evaluar algunos biomarcadores, en muestras de individuos con dengue, febriles no dengue, e individuos sin antecedente de infección por DENV. El análisis evaluó la asociación entre los niveles de estas moléculas y la severidad de la enfermedad. Los niveles de los biomarcadores analizados no presentaron elevación significativa al comparar los grupos de diagnóstico y la severidad. Se encontró una asociación moderada entre los niveles de HMGB1 y la edad, y los niveles de tropomiosina con el recuento de leucocitos y plaquetas en el grupo DWoWS. Nuestros hallazgos confirman la complejidad de la búsqueda de biomarcadores para establecer pronóstico, y resaltan la necesidad del estudio simultáneo de biomarcadores en diferentes fases de la enfermedad para identificar su dinámica y asociación con las manifestaciones clínicas. El tercer componente del trabajo evaluó la activación y disfunción del endotelio y el papel que podría desempeñar la proteína HMGB1. La estrategia aplicada incluyó la evaluación de un modelo de células endoteliales polarizadas, expuestas a sobrenadantes de PBMCs infectados por DENV2 (I – Mo), no infectados (NI – Mo) o la proteína HMGB1 recombinante. Para identificar si los cambios en el endotelio fueron producidos por HMGB1 u otros factores, se consideró la evaluación de tres condiciones de neutralización. La primera dirigida contra HMGB1, la segunda la inhibición de los receptores de esta proteína (TLR4 y la combinación RAGE-TLR4), y la tercera la neutralización de tres citocinas (TNF-α, IL-6 e IL-8). Se identificó que las EC expuestas a los sobrenadantes I - Mo liberan HMGB1 entre otras moléculas, indujeron cambios en el endotelio caracterizados por un perfil inflamatorio temprano, sin afectar la viabilidad celular. La inhibición directa e indirecta evidenció que disminución en la TEER, variación en la permeabilidad, aumento en la expresión de mRNA y la expresión y localización de proteínas, son debidos al efecto conjunto de HMGB1 con otras moléculas. Estos hallazgos demuestran que los estímulos I – Mo y rHMGB1 están relacionados con la activación temprana del endotelio, los cambios morfológicos, y la alteración de la continuidad de las células. Podemos concluir que la activación y el daño endotelial son producto de la actividad de HMGB1 como alarmina, lo cual evidencia una cinética diferente durante el curso de la infección. Este efecto conduce a que la búsqueda de biomarcadores se convierta en un panorama complejo de interpretación, que requiere de una exploración de estrategias para la determinación del momento específico en el que presentan las manifestaciones clínicas asociadas a severidad y variaciones en los biomarcadores, conduciendo a la correcta interpretación de estos parámetros, y conduzcan a que la aplicación de algoritmos de diagnóstico tengan un alto desempeño en la detección y confirmación de los casos, demostrando su eficacia en la aplicación en una población específica.Ítem Estudio de la participación del sistema ubiquitina-proteasoma durante el ciclo replicativo del virus chikungunya(2021) López Ibarra, Lady Stephanie; Calvo Tapiero, Eliana Patricia; Castellanos Parra, Jaime EduardoEl virus chikungunya (CHIKV) es un arbovirus de la familia de los alfavirus causante enfermedad febril acompañada de síntomas como rash cutáneo, poliartralgia, y mialgia.A pesar que el virus fue aislado por primera vez en la década de los 60, los periodos inter-epidémicos de más de 10 años y su contención en el continente Africano y Asiático por varias décadas contribuyó a que la investigación en este virus hasta antes de 2005, haya sido escasa y a que hoy en día se desconozcan numerosos aspectos de su ciclo replicativo y de la patogenia causada por él. Desde el año 2000 se considera una enfermedad reemergente, que ha infectado a millones de personas alrededor del mundo convirtiéndolo en un problema de salud pública. A pesar de la recurrencia de este virus, actualmente no existen medicamentos aprobados para su tratamiento o vacunas que permitan de alguna forma disminuir los brotes. Una estrategia para encontrar nuevos antivirales es mediante la identificación de factores celulares que sean indispensables durante el ciclo de replicación viral. En este estudio se analizó la relevancia del sistema ubiquitina-proteasoma durante el ciclo de replicación de CHIKV. En esta investigación se encontró que durante la inhibición del proteasoma y de enzimas deubiquitinadoras, se redujo drásticamente la producción de nuevas partículas virales y el porcentaje de infección disminuyó, en una fase temprana de la infección, es decir en un evento post-entrada del ciclo de replicación viral. Además, el tratamiento con los inhibidores permitió establecer los eventos de la replicación viral que más se veían afectados, es decir, la síntesis de ARN viral y la traducción de proteínas virales. Por otra parte, se evidenció un cambio significativo en los perfiles de ubiquitinación durante la infección por CHIKV. Adicionalmente, mediante estudios de proteómica se identificó un aumento significativo en el número de proteínas ubiquitinadas en células infectadas, se estableció que estas proteínas están involucradas en distintas vías de señalización o del metabolismo celular, lo cual sugiere una modulación de estas proteínas durante la infección por CHIKV. Finalmente, se determinó que las proteínas estructurales y no estructurales de CHIKV son blancos de ubiquitinación. Nuestros resultados demostraron como el virus chikungunya requiere de los distintos componentes del sistema ubiquitina-proteasoma para establecer una infección productiva. Este hallazgo tiene una fuerte implicación pues se encontró un factor celular clave asociado en el ciclo de replicación viral, y como éste puede ser postulado para el desarrollo de nuevas estrategias antivirales.Ítem Evaluación de la actividad inmunomoduladora in vitro de un aislado clínico de Citomegalovirus humano(2023) Bohórquez Ávila, Sonia del Pilar; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Velandia Romero, Myriam Lucía; Bohórquez Ávila, Sonia del Pilar [0000-0002-2113-3959]El Citomegalovirus humano (HCMV) continúa siendo uno de los principales causantes de complicaciones en los pacientes trasplantados. A pesar de que existen varios reportes sobre la relación entre determinado(s) genotipo(s), el curso clínico e incluso el deceso del paciente, la identificación del genotipo de HCMV no se hace rutinariamente después de detectar la infección o la reactivación. Adicionalmente se sabe que este virus ejerce una compleja actividad inmunomoduladora, la cual al parecer le permite persistir en latencia en individuos inmunocompetentes, pero que en inmunosuprimidos puede facilitar la reactivación de la infección y la diseminación a diferentes compartimientos anatómicos y tejidos, hecho que puede estar relacionado con la gran variedad de complicaciones asociadas. El estudio in vitro de la actividad inmunomoduladora de HCMV se hace empleando cepas de referencia, con alto número de pasajes en cultivo celular, sin tomar en consideración las alteraciones genómicas producto de la adaptación, que pueden afectar el tropismo, la modulación inmunológica y la latencia, entre otros. Estas cepas se usan por la dificultad de obtener aislados clínicos de HCMV debido al ciclo replicativo lento y la probabilidad de coinfecciones. Es por esto por lo que se planteó evaluar y comparar la actividad inmunomoduladora in vitro de un aislado clínico de HCMV con cepas de referencia, en una línea celular de monocitos humanos. Para ello se plantearon tres estrategias metodológicas. En la primera se evalúo la posible relación entre los genotipos de HCMV con las complicaciones y el desenlace, en pacientes pediátricos receptores de trasplante de precursores hematopoyéticos (RTPH). En segundo lugar, se establecieron las condiciones metodológicas para aislar y cosechar HCMV a partir de muestras clínicas; finalmente, se evaluó y comparó in vitro la activación y expresión de mediadores inflamatorios en una línea celular de monocitos/macrófagos infectados con el aislado clínico, teniendo como referencia el efecto que inducen dos cepas de laboratorio del HCMV. A continuación, se describe la metodología y los resultados obtenidos de cada uno de los objetivos planteados. HCMV se transmite por contacto próximo a través de fluidos corporales como la orina, leche materna y saliva, por lo que la mayoría de los individuos infectados han adquirido el virus en los primeros años de vida y aparece en estos fluidos en las descargas virales asintomáticas. Por otra parte, se han identificado cinco genotipos de HCMV lo que demuestra su variabilidad genética y algunos estudios sugieren una relación entre el genotipo infectante, las coinfecciones (más de un genotipo) y el desenlace, sobre todo en RTPH. Sin embargo, hasta el momento en el país la genotipificación no es un procedimiento rutinario y no se considera a la saliva como una muestra confiable, útil para su rastreo. Para evaluar esto, se obtuvieron 105 muestras de saliva de 20 pacientes pediátricos RTPH recolectadas semanalmente en la Unidad de Trasplante de Precursores Hematopoyéticos de la Fundación Hospital Pediátrico la Misericordia (UT-HOMI). Se confirmó la infección de HCMV por PCR detectando el gen UL83; y por PCR anidada y secuenciación se determinó el genotipo. Se detectó el ADN viral en 29 muestras de 12 pacientes y en todos los casos se confirmó el genotipo gB1, sin coinfecciones. Luego del análisis no se estableció ninguna relación entre la detección de HCMV en saliva, el genotipo identificado, con las complicaciones y el desenlace en el grupo de pacientes que participó en el estudio. Este resultado confirma la alta frecuencia de HCMV en los pacientes, la factibilidad de emplear la saliva para la detección y genotipificación de HCMV y la necesidad de evaluar la relación entre el genotipo(s) identificado(s) con el curso clínico del paciente trasplantado. De otro lado, la obtención de aislados clínicos a partir de fluidos corporales puede resultar difícil, por el tiempo que puede demorar la aparición de efecto citopático (ECP) y porque en los primeros pasajes las partículas virales permanecen asociadas a las células y la concentración es baja en el sobrenadante celular. En nuestro segundo objetivo se propuso aislar el HCMV a partir de muestras de orina, lavado broncoalveolar (LBA) y plasma de pacientes hospitalizados en el HOMI. De 61 niños evaluados, se obtuvieron 6 muestras de orina, 27 de LBA y 37 plasmas. De las 9 muestras positivas por PCR para HCMV, se hicieron diluciones que se inocularon sobre células MRC-5 utilizando la técnica de centrifugación (Shell-vial), luego se retiró el inóculo y se observaron diariamente. De las 5 muestras con ECP se recolectó el sobrenadante, el cual fue inoculado nuevamente en células MRC-5. Sobre estas últimas -con ECP atribuible a HCMV- se recolectó y almacenó a -80°C el lisado celular sonicado y el sobrenadante. En las células inoculadas con plasma el cultivo mostró daño celular temprano que impidió continuar con el aislamiento. Solo a partir de una muestra de LBA -negativa para Virus Herpes Simplex 1 y 2, Adenovirus, Enterovirus y Poliomavirus-, se logró el aislamiento y amplificación de un HCMV genotipo gB1, que denominamos B52, con un título de 2.18 x106 UFP/mL, luego de su segundo pasaje. Estos resultados muestran que la obtención de aislados clínicos a partir de las descargas virales asintomáticas en fluidos como la saliva, LBA y la orina puede ser eficaz y eficiente implementando algunas estrategias técnicas como el Shell vial y lisando las células, lo que mejora los títulos y permite obtener un aislado con muy bajos pasajes en cultivo. Finalmente, luego de la infección primaria, HCMV establece latencia en las células CD34+ y persiste en los monocitos de sangre periférica CD14+. En estas células, el HCMV modula la respuesta inmunológica: i) promoviendo la activación de los monocitos circulantes y su diferenciación a macrófagos tisulares; ii) regulando la secreción de algunas citocinas y iii) reclutando células inmunes; así, genera un ambiente proinflamatorio, al tiempo que regula la respuesta inmune antiviral. Esta actividad es uno de los atributos de HCMV que lo hace altamente patogénico en individuos inmunosuprimidos, como los RTPH. Para el estudio de la actividad inmunomoduladora de HCMV comúnmente se utilizan cepas de laboratorio como Towne y Merlin, en las que por su alto o bajo número de pasajes -respectivamente- se han establecido modificaciones genómicas comprometiendo segmentos importantes que cambian el tropismo y la patogenicidad. Aun así, estas cepas son usadas con frecuencia debido a la dificultad de obtener aislados clínicos. Para evaluar el efecto del aislado clínico B52 en la activación y expresión de mediadores inflamatorios se utilizó la línea celular monocítica THP-1; las células fueron infectadas a una MOI de 1, con el aislado o con las cepas de referencia (Towne o Merlin), aplicando el modelo latencia – reactivación. Como control de diferenciación y activación celular las THP-1 fueron tratadas (+) o no tratadas (-) con forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), y evaluadas a las 48, 72 y 120 horas posinfección (hpi). Al cabo de cada uno de los tiempos, se evaluó por citometría de flujo la expresión de marcadores de diferenciación CD14, CD64, CD11b, CD68 y activación celular CD206 y HLA-DR. Por RT-qPCR la expresión relativa de los transcritos para las citocinas asociadas a la activación, diferenciación y movilización de monocitos/macrófagos como IFN e IFNβ; TNF, IL-1β, CXCL-10, IL-8 e IL-10. Finalmente, en el sobrenadante se cuantificó la concentración de algunos de estos y otros mediadores como IFNγ, IL-6, CCL-18, IL-12p70, CXCL-9, IL-4, RANTES, MCP-1, CCL-22, MIP-1β, FAS-L y los factores de crecimiento VEGF-A, PDGF-AB. La expresión de marcadores de superficie de las células infectadas y tratadas con PMA mostró una expresión mayor de los marcadores CD14 y CD11b respecto al control. El efecto del aislado clínico B52 sobre la expresión de CD206 y HLA-DR fue dependiente de la estimulación con PMA y se incrementó con el tiempo. Las cepas de laboratorio Merlin y Towne indujeron una expresión más temprana de estos marcadores con disminución a las 120 hpi. La expresión relativa de los transcritos mostró que B52 moduló diferencialmente en el tiempo la expresión de los interferones y las citocinas proinflamatorias TNFα, CXCL-10, IL-1β e IL-8 y sobrereguló la expresión relativa de IL-10, respecto a las cepas Merlin y Towne. Sobre las concentraciones de citocinas y factores de crecimiento en el sobrenadante se encontró que el efecto de la infección con B52 estuvo por encima del inducido por las cepas de laboratorio en la mayoría de los casos, además de observarse en las primeras 48 horas luego de la infección. El efecto del tratamiento con PMA fue variable y no siempre significó incremento de las concentraciones de los analitos. Finalmente, en la secreción de IL-10 y de FAS-L, se observó un efecto diferencial y temprano con niveles más altos inducido por B52, principalmente en las células PMA (-), en comparación con el efecto de las cepas de laboratorio.Ítem Evaluación de la excitotoxicidad por glutamato inducida por el virus dengue neuroadaptado D4MB-6(2015) Camacho Ortega, Sigrid Johanna; Velandia Romero, Myriam Lucia; Castellanos Parra, Jaime EduardoEl virus de dengue (DENV), a pesar de ser clasificado como un virus no neurotrópico, induce durante la infección manifestaciones neurológicas como la alteración de la conciencia. Hasta el momento, los signos y síntomas neurológicos que aparecen durante la infección por DENV no se han asociado a un mecanismo en particular. Durante la infección con el JEV, WNV y el HIV se produce la disfunción y muerte de neuronas mediada por procesos excitatorios. Para Dengue, hasta el momento sólo se ha reportado en modelos in vivo e in vitro y en muestras post-mortem el daño del tejido y la perdida neuronal, sin embargo no se conoce si durante la infección con este virus suceden eventos excitotoxicos o si la la exacerbada respuesta inmune afecta la superviviencia neuronal En el presente estudio se planteó -utilizando el modelo de neuroinfección desarollado en nuestro laboratorio-, evaluar las posibles causas de alteración y muerte neuronal inducidas por la cepa D4MB-6 y el efecto de dos fármacos, ácido valproico (VPA) y MK-801 con el fin de. Para esto, se infectaron ratones Balb/C de 7 dpn con el D4MB-6 tratados o no tratados con VPA o MK 801. Los animales fueron observados y pesados diariamente por 3 o 6 dpi y sacrificados para la extracción del encéfalo y médula. De estos tejidos se obtuvieron homogenizados o cortes histológicos para evaluar la infección y producción viral, la morfología, la expresión de algunas proteínas pro y anti-apoptóticos. En los animales infectados no tratados, las manifestaciones clínicas fueron evidentes al 3er dpi y severas al 6to dpi, al igual que las alteraciones histológicas, caracterizadas por apoptosis, necrosis y espongiosis neuronal acompañadas de alteraciones vasculares como hemorragias, edema e infiltrado de células mononucleares. En esta misma, condición se observó astrogliosis, neurodegeneración y aumento en la expresión de proteínas pro-apoptóticas, como Casp 3, 8, y Bax. Por el contrario, en los animales infectados y tratados todas las manifestaciones y alteraciones neurológicas fueron reducidas, detectando sólo algunas células en apoptosis y neurodegeneración en el cerebelo de animales infectados y tratados con VPA y MK 801, al igual que la producción y transcritos pro- apoptóticos. Estos resultados sugieren que el virus D4MB-6 induce encefalitis y mielitis, como alteración vascular, así como muerte neuronal mediada por procesos excitotóxicos e inmunológicos. Dichas alteraciones son prevenidas de forma total o parcial con los fármacos MK 801 y VPA.Ítem Evaluación del desempeño de diferentes pruebas serológicas y virologicas para la confirmación de casos de infección por CHIKV en niños con síndrome febril(2021) Jaimes Jaimes, Nayeli Alejandra; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Jaimes Jaimes, Nayeli Alejandra [0000-0001-8274-8562]Introducción: El diagnóstico de laboratorio es importante para la confirmación de los casos probables de infección por virus de chikungunya (CHIKV) y se recomienda usar pruebas moleculares basadas en la detección del genoma viral por PCR previa transcripción inversa, en muestras recolectadas durante la fase febril. Objetivo: Evaluar el desempeño de diferentes métodos de detección de RNA viral de CHIKV en muestras de individuos con sospecha de arbovirosis. Metodología: Se realizó extracción de RNA a muestras de suero de individuos febriles, y se procesaron por el método descrito por Calvo et al, en 2016 como estándar de diagnóstico. Simultáneamente se procesaron por una PCR anidada y dos qPCR utilizando los cebadores reportados por Pastorino en 2005 y Lanciotti en 2007. Los datos obtenidos se analizaron en Stata, evaluando la frecuencia de muestras positivas y comparando las variables operativas de cada una de las pruebas. Determinando la sensibilidad y especificidad de cada una de las pruebas. Resultados: Del total de las 196 muestras analizadas, el 83,16% fueron positivas para la RT-qPCR dirigida contra el gen E1, el 79,59% positivas para la qPCR dirigida contra el gen nsP4, el 73,47% y 75% resultaron positivas en las PCR anidada dirigida contra el gen E1 y NSP4 respectivamente. La sensibilidad y especificidad de la qPCR de Pastorino fue de 90.0% (IC 84.2%-93.8%) y 39.1% (IC 26.4%-53.5%), mientras que los valores de sensibilidad obtenidos en la PCR anidada fueron 95.7% (IC 91.2%-98%) y 83.3% (IC 76.6%-88.4%), mientras que la especificidad fue de 98.9% (IC 90.6%-99.9%) y 54,3% (IC 40.2%-67.8%) respectivamente. Conclusión: Los resultados indican que la qPCR realizada con los cebadores de Pastorino presenta una sensibilidad superior respecto a las dos PCR anidadas, lo cual sugiere que esta prueba permitiría identificar un mayor número de casos.Ítem Evaluación del papel inmunoregulador de sST2 en células mononucleares de sangre periférica durante la infección ex vivo con virus denguePérez Acosta, Adriana Marisol; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Delgado Tiria, Felix GiovanniEl dengue grave se caracteriza por altos niveles de citocinas como TNFα e IL-6, que pueden inducir aumento en la permeabilidad vascular, debido específicamente a un efecto pro-inflamatorio/vasodilatador sobre las células del endotelio vascular. Recientemente, se ha reportado que pacientes con dengue presentan niveles elevados de la isoforma soluble de ST2 (sST2) en el suero, sugiriendo que esta proteína podría jugar un papel importante durante la inmunopatogénesis de la enfermedad. Por otro lado, se ha reportado que sST2, un miembro de la familia de receptores de IL-1, inhibe la producción de citocinas proinflamatorias en macrófagos estimulados con lipopolisacárido (LPS). El presente trabajo tuvo como propósito establecer un modelo de infección in vitro, empleando células mononucleares de sangre periférica (CMSP) no fraccionadas infectadas con virus dengue serotipo 2 (DENV-2), que permitiera identificar la célula diana permisiva a la infección con el virus y aquellas células responsables de la producción de TNFα e IL-6, para así evaluar efecto de la proteína recombinante sST2-Fc sobre la producción de estas citocinas proinflamatorias. Como resultado, se encontró que las CMSP fueron permisivas a la infección y los monocitos CD14+, pero no linfocitos CD3+ o CD19+, fue la subpoblación celular preferencialmente infectada y responsable de la producción de TNFα e IL-6. Adicionalmente, las CMSP infectadas no produjeron sST2. Finalmente, la proteína recombinante sST2-Fc ejerció su efecto imunoregulador a una concentracion 10µg/mL sobre monocitos estimulados con LPS por 12 horas, pero este efecto no fue observado cuando los monocitos fueron infectados con DENV-2. Estos resultados podrían sugerir que la proteína sST2 no juega un papel en la regulación de la respuesta inmune durante la infección con DENV y que por el contrario, podría participar en el desarrollo del dengue grave.Ítem Expresión de marcadores de diferenciación osteogénica en células mesenquimales de pulpa dental tratadas con ácido fólico y BMP2(2021-08-12) Delgado Parra, Julián David; Hernández Garcés, Daniel; Bendahan Álvarez, Zita Carolina; Escobar Márquez, Lina María; Mora Díaz, Ingrid Isabel; Castellanos Parra, Jaime EduardoLa incidencia mundial de trastornos óseos ha aumentado en los últimos años. y los injertos óseos son el tratamiento más frecuente, a pesar de sus complicaciones (rechazo, transmisión de enfermedades, disponibilidad limitada y morbilidad). La ingeniería de tejidos pretende desarrollar sustitutos biológicos que restablezcan la función de los tejidos alterados. Aunque la proteína morfogenética ósea (BMP2) y el ácido fólico (FA) son factores importantes para la formación y regeneración ósea, su efecto sobre las células mesenquimales (MSC) sigue siendo controvertido. Objetivo: Determinar la expresión de marcadores de diferenciación osteogénica en células madre de la pulpa dental humana (hDPSC) tratadas con FA y BMP2. Métodos: Las hDPSC aisladas y caracterizadas se trataron con dos concentraciones diferentes de FA y BMP2 para evaluar cambios fenotípicos mediante microscopía invertida, tasa de proliferación, mediante ensayo de resazurina, cambios en el ciclo celular mediante tinción con 7AAD y marcadores de diferenciación osteogénica: osterix (OSX), osteocalcina (OCN) y RUNX2 por PCR en tiempo real. Las variables cuantitativas se analizaron con las pruebas t de Student o ANOVA. Resultados: Las células tratadas con 1,6mM y 0,8mM de FA se observaron más alargadas y menos confluentes que las no tratadas (control), se observó una reducción en la proliferación en las células tratadas con FA, sin alterar el contenido de ADN ni el ciclo celular. BMP2 (50-100ng/ml) no generó cambios morfológicos, pero aumentó la proliferación celular 8,4%-6,4% y estimuló significativamente la expresión de RUNX2 y OSX en comparación con FA. Conclusiones: FA indujo cambios morfológicos y reducción en la proliferación de hDPSC, en contraste con BMP2, que indujo un aumento en el número de células. FA 0,8mM y BMP2 50ng/ml promovieron la diferenciación de hDPCs hacia el linaje osteoblástico, verificado con la expresión de: OSX, OCN, RUNX2. FA podría promover la formación de hueso, pero se necesitan más estudios para comprobar su efecto.Ítem Identificación de las vías de propagación utilizadas por un virus dengue neuroadaptado para ingresar al sistema nervioso(2013) Bastidas Legarda, Leidy Yamile; Velandia Romero, Myriam Lucia; Castellanos Parra, Jaime EduardoEl Virus del Dengue (DENV), aunque es considerado un virus no neurotrópico, en algunas ocasiones logra ingresar, invadir y alterar el Sistema Nervioso (SN), induciendo manifestaciones neurológicas como dolor de cabeza severo, desórdenes en el comportamiento, convulsiones y parálisis, entre otras. Esto sugiere que el perfil clínico de la enfermedad del dengue está cambiando y que el virus en algunos casos presenta un carácter neurotrópico, neuroinvasivo y neurovirulento, sin embargo, hasta el momento se desconocen los mecanismos asociados a la neuropatogenia por DENV. Recientemente nuestro grupo desarrolló un modelo de neuroinfección en ratones Balb/c utilizando una cepa de DENV-4 neuroadaptada, denominada D4MB-6 que inoculada por la vía intraperitoneal (i.p), infecta el sistema nervioso e induce signos de enfermedad similares a los observados en humanos, sin embargo, los mecanismos que podría utilizar este virus para ingresar e invadir el SN aún no son claros. Los virus naturalmente nerurotrópicos pueden diseminarse por la vía hematógena y llegar a los capilares cerebrales e ingresar al parénquima cerebral atravesando la Barrera Hemato-Encefálica (BHE), como virus libre, asociado a células inflamatorias o infectando células endoteliales de la microvasculatura cerebral. Estos virus también pueden ser capturados por terminaciones nerviosas y viajar por transporte axonal retrógrado hasta el soma neuronal en los Ganglios de Raíz Dorsal (GRD) ó médula espinal y diseminarse dentro del tejido nervioso.Ítem Impacto en la mortalidad y severidad de la enfermedad por COVID-19, análisis desde la clínica a las redes de interacción de la enfermedad(2022) Galindo, Lady Carolina Arias; Franco, Adriana Paola; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Galindo, FrancoLos estudios de análisis mixto cuantitativo y cualitativo son factibles y ofrecen información adicional que permite entender la interacción entre una enfermedad y una población, sin dejar de lado factores de vínculo no medibles en los estudios tradicionales. Desde la perspectiva de la teoría de redes pueden aportar elementos para la comprensión tanto de la estructura como de los cambios dinámicos que se presentan en la enfermedad. La mortalidad por COVID-19 es elevada en especial en pacientes que requieren ingreso a unidad de cuidado intensivo por la severidad de la enfermedad, en nuestra población esta fue mayor en pacientes de régimen subsidiado de salud donde la edad, la presencia de comorbilidades cardiovasculares, renales y hepáticas confieren aumento del riesgo de muerte. En relación con la clasificación de vulnerabilidad de acuerdo al índice de pobreza no se encontraron diferencias en mortalidad, además se presentó un subregistro importante.Ítem Molecular and biological characterization of an Asian-American isolate of chikungunya virus(2021) Archila Hernández, Edwin Darío; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Calvo Tapiero, Eliana Patricia; Archila Hernández, Edwin Darío [0000-0002-8633-8031]Background: Chikungunya virus is an arthropod-transmitted virus that causes chikungunya fever, a disease characterized by severe muscle and joint pain. The virus was introduced to the Americas in 2013 and caused approximately 2.7 million cases during the subsequent two years. The lack of knowledge regarding the biological behavior of the viral strains circulating during the outbreak has motivated the characterization of a virus isolated in Colombia in 2015. Methods: The full genomes of isolated and cultured viruses were obtained using next-generation sequencing. The infective and replicative capacities and their impact on viability were evaluated in three different cell lines, HEK293T, Huh-7, and MRC-5, to describe the biological behavior. The infection percentages were determined by flow cytometry, and cytopathic effects were evaluated by conducting a resazurin fluorescent metabolic assay. The viral yield of each cell line was quantified by conducting a virus plaque formation assay. The virus proteins and RNA kinetics were then evaluated by western blotting and Reverse transcription -qPCR. Results: The COL7624 isolate was clustered with other American and Caribbean sequences in the Asian American lineage. The T669A substitution in E2 distinguished it from other Colombian sequences reported in 2014. After 48 hpi, the three cell lines analyzed reached infection percentages exceeding 65%, generating a high load of infectious viral progeny. The infection kinetics indicated that the replication peak occurred around 24 hpi, although gRNA could be detected in the supernatant from 4 hpi onwards. Infection caused the overexpression of interferon and proinflammatory cytokines, such as IL-1, TNF-α, and IL-8. Conclusions: The COL7624 isolate exhibited a high infective and replicative capacity and induced the activation of the cellular immune response, similar to isolates belonging to the other genotypes.Ítem Retinoic and ascorbic acids induce osteoblast differentiation from human dental pulp mesenchymal stem cells(Elsevier, 2021-04-01) Escobar, Lina María; Escobar, José Daniel; Bendahan, Zita C.; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Castellanos Parra, Jaime Eduardo [0000-0003-1596-8383]