Especialización en Ortodoncia

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https://hdl.handle.net/20.500.12495/56

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Examinando Especialización en Ortodoncia por Autor "Bendahan Álvarez, Zita Carolina"

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    Expresión de marcadores de diferenciación osteogénica en células mesenquimales de pulpa dental tratadas con ácido fólico y BMP2
    (2021-08-12) Delgado Parra, Julián David; Hernández Garcés, Daniel; Bendahan Álvarez, Zita Carolina; Escobar Márquez, Lina María; Mora Díaz, Ingrid Isabel; Castellanos Parra, Jaime Eduardo
    La incidencia mundial de trastornos óseos ha aumentado en los últimos años. y los injertos óseos son el tratamiento más frecuente, a pesar de sus complicaciones (rechazo, transmisión de enfermedades, disponibilidad limitada y morbilidad). La ingeniería de tejidos pretende desarrollar sustitutos biológicos que restablezcan la función de los tejidos alterados. Aunque la proteína morfogenética ósea (BMP2) y el ácido fólico (FA) son factores importantes para la formación y regeneración ósea, su efecto sobre las células mesenquimales (MSC) sigue siendo controvertido. Objetivo: Determinar la expresión de marcadores de diferenciación osteogénica en células madre de la pulpa dental humana (hDPSC) tratadas con FA y BMP2. Métodos: Las hDPSC aisladas y caracterizadas se trataron con dos concentraciones diferentes de FA y BMP2 para evaluar cambios fenotípicos mediante microscopía invertida, tasa de proliferación, mediante ensayo de resazurina, cambios en el ciclo celular mediante tinción con 7AAD y marcadores de diferenciación osteogénica: osterix (OSX), osteocalcina (OCN) y RUNX2 por PCR en tiempo real. Las variables cuantitativas se analizaron con las pruebas t de Student o ANOVA. Resultados: Las células tratadas con 1,6mM y 0,8mM de FA se observaron más alargadas y menos confluentes que las no tratadas (control), se observó una reducción en la proliferación en las células tratadas con FA, sin alterar el contenido de ADN ni el ciclo celular. BMP2 (50-100ng/ml) no generó cambios morfológicos, pero aumentó la proliferación celular 8,4%-6,4% y estimuló significativamente la expresión de RUNX2 y OSX en comparación con FA. Conclusiones: FA indujo cambios morfológicos y reducción en la proliferación de hDPSC, en contraste con BMP2, que indujo un aumento en el número de células. FA 0,8mM y BMP2 50ng/ml promovieron la diferenciación de hDPCs hacia el linaje osteoblástico, verificado con la expresión de: OSX, OCN, RUNX2. FA podría promover la formación de hueso, pero se necesitan más estudios para comprobar su efecto.
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    Inducción de la diferenciación de células madre mesenquimales y pre-osteoblastos cultivados con medio condicionado In vitro
    (2023) Lugo Angulo, Wendy Yolanny; Escobar Márquez, Lina María; Bendahan Álvarez, Zita Carolina; Castaño Duque, Sandra Patricia
    Antecedentes: Las células madre mesenquimales (MSCs) se han venido investigando en regeneración tisular, con la intención de desarrollar nuevas alternativas terapéuticas en diferentes patologías que requieran regeneración o neoformación ósea, como en labio y paladar hendido (LPH). La incidencia mundial de LPH ha aumentado en los últimos años, siendo los injertos óseos los tratamientos más comunes a pesar de sus complicaciones. La ingeniería de tejidos viene desarrollando alternativas a la colocación directa de MSC, analizando moléculas bioactivas secretadas por las células (secretoma) como inductores de diferenciación celular; sin embargo, no hay claridad sobre cuál secretoma es más efectivo. Objetivo: Comparar el efecto sobre la diferenciación de células mesenquimales de pulpa (hDPSCs) y pre-osteoblastos (Saos-2), al ser cultivados con medio condicionado (secretoma). Métodos: Previa aprobación del comité institucional de ética y firma de consentimiento informado, se cultivaron y caracterizaron hDPSC de terceros molares con extracción indicada y células Saos-2 (ATCC HTB-85™). Las hDPSCs se trataron con secretoma de Saos-2 (hDPSCs/Saos-2) y las Saos-2 con secretoma de hDPSCs (Saos-2/hDPSCs). Se evaluaron cambios fenotípicos con microscopio invertido, la tasa de proliferación celular mediante ensayo de resazurina, formación de nódulos de calcio mediante rojo de alizarina, y cambios en expresión de RUNX2 y Osteocalcina (OCN) mediante RT-qPCR. Los experimentos se realizaron por triplicado. El análisis estadístico se realizó mediante ANOVA, Kruskall-Wallis y Scheffé. Resultados: Saos-2/hDPSCs a partir de los 8 días de tratamiento se observaron más largadas y fibroblastoides comparadas con el control, similares a las tratadas con medio de diferenciación osteogénica (MD). hDPSCs/Saos-2 aumentaron sus prolongaciones celulares, su tamaño y su aspecto fibroblastoide; estos cambios fueron más evidentes que en las tratadas con MD. hDPSCs/Saos-2 y MD redujeron la proliferación celular a partir del día 10 de tratamiento, con relación al control (p<0.05). Saos-2/hDPSCs incrementaron la proliferación del sexto al octavo día de tratamiento, posteriormente se redujo el número de Saos-2/hDPSCs y MD, en comparación con control (p<0.05). Se evidenciaron nódulos de mineralización en todos los grupos experimentales y la mayor absorbancia del colorante se evidenció en hDPSCs/Saos-2, Saos-2/hDPSCs y MD a los 21 días de tratamiento, siendo mayor el valor encontrado en Saos-2/hDPSCs comparada con las hDPSCs/Saos-2 (p>0.05). Al evaluar genes de diferenciación celular se encontró que el gen RUNX2 incrementó su expresión significativamente en el grupo de células DPSC tratadas con MD durante 7 días. Después de 21 días se observó un incremento de la expresión de este gen en las células Saos-2/DPSC y en las tratadas con MD. La expresión de OCN también se vio aumentada en las células DPSC y Saos-2 tratadas con MD y en las células Saos-2/ DPSC durante 7 y 21 días. Conclusión: El secretoma de DPSC y de Saos-2 indujo cambios morfológicos, reducción en la proliferación y formación de nódulos de calcificación que sugieren la inducción de diferenciación hacia un fenotipo osteoblástico. Sin embargo, la expresión de marcadores de diferenciación ósea como OCN y RUNX2 solo se incrementaron en las células tratadas con MD y en las células Saos-2/DPSC.