Maestría en Ciencias Básicas Biomédicas
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Examinando Maestría en Ciencias Básicas Biomédicas por Autor "Calvo Tapiero, Eliana Patricia"
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Ítem Caracterización celular y funcional de macrófagos humanos polarizados infectados con el virus de Chikungunya(2022) Pinzón Burgos, Eduar Fernando; Delgado Tiria, Felix Giovanni; Calvo Tapiero, Eliana Patricia; Pinzón Burgos, Eduar Fernando [0000-0002-4521-143X]Durante el año 2015 según un informe del Instituto Nacional de Salud (INS), los casos reportados por infección con el virus del Chikungunya (CHIKV) en el país superaron los 100.000, convirtiéndose en un grave problema de salud pública. Aunque en años recientes la tasa de infección ha disminuido considerablemente, es una enfermedad de presencia constante entre la población colombiana alcanzado el centenar de casos confirmados para el año 2021, según datos del INS. A la fecha, se ha descrito que el papel de los macrófagos en la infección por CHIKV no solo se suscribe a uno puramente efector en la fase aguda de la enfermedad, sino que también se ha evidenciado su importancia en la cronicidad de algunos escenarios clínicos secundarios a la infección como la artritis y el daño a algunos órganos. En esta investigación se demostró que CHIKV es capaz de infectar macrófagos polarizados humanos afectando el perfil de expresión y producción de proteínas, un hecho interesante es que el perfil de susceptibilidad a la infección parece variar entre los grupos de comparación (macrófagos M0, M1 y M2). A través de los ensayos de plaqueo, citometría de flujo y RT-qPCR se determinó que existen diferencias en los patrones de infección para la diferentes sub poblaciones, siendo M2 y M0 más susceptibles a la infección que los macrófagos M1. De igual forma, se demostró a través del análisis de la expresión génica que macrófagos polarizados e infectados con CHIKV sobre regulan la expresión de proteínas y citocinas pro inflamatorias sin importar su origen de polarización, este hallazgo se mantuvo al realizar el análisis de las proteínas liberadas al sobrenadante, lo que permite establecer una relación directa entre la infección con CHIKV y la activación de vías de señalización celular que promuevan el sostenimiento de un micro ambiente celular pro inflamatorio. Los hallazgos encontrados permiten establecer una posible relación entre la infección de macrófagos con CHIKV y su posible efecto en la creación y mantenimiento de un ambiente marcadamente pro inflamatorio, como el que se describe en algunas patologías crónicas secundarias a la primoinfección con el virus.Ítem Estudio de la participación del sistema ubiquitina-proteasoma durante el ciclo replicativo del virus chikungunya(2021) López Ibarra, Lady Stephanie; Calvo Tapiero, Eliana Patricia; Castellanos Parra, Jaime EduardoEl virus chikungunya (CHIKV) es un arbovirus de la familia de los alfavirus causante enfermedad febril acompañada de síntomas como rash cutáneo, poliartralgia, y mialgia.A pesar que el virus fue aislado por primera vez en la década de los 60, los periodos inter-epidémicos de más de 10 años y su contención en el continente Africano y Asiático por varias décadas contribuyó a que la investigación en este virus hasta antes de 2005, haya sido escasa y a que hoy en día se desconozcan numerosos aspectos de su ciclo replicativo y de la patogenia causada por él. Desde el año 2000 se considera una enfermedad reemergente, que ha infectado a millones de personas alrededor del mundo convirtiéndolo en un problema de salud pública. A pesar de la recurrencia de este virus, actualmente no existen medicamentos aprobados para su tratamiento o vacunas que permitan de alguna forma disminuir los brotes. Una estrategia para encontrar nuevos antivirales es mediante la identificación de factores celulares que sean indispensables durante el ciclo de replicación viral. En este estudio se analizó la relevancia del sistema ubiquitina-proteasoma durante el ciclo de replicación de CHIKV. En esta investigación se encontró que durante la inhibición del proteasoma y de enzimas deubiquitinadoras, se redujo drásticamente la producción de nuevas partículas virales y el porcentaje de infección disminuyó, en una fase temprana de la infección, es decir en un evento post-entrada del ciclo de replicación viral. Además, el tratamiento con los inhibidores permitió establecer los eventos de la replicación viral que más se veían afectados, es decir, la síntesis de ARN viral y la traducción de proteínas virales. Por otra parte, se evidenció un cambio significativo en los perfiles de ubiquitinación durante la infección por CHIKV. Adicionalmente, mediante estudios de proteómica se identificó un aumento significativo en el número de proteínas ubiquitinadas en células infectadas, se estableció que estas proteínas están involucradas en distintas vías de señalización o del metabolismo celular, lo cual sugiere una modulación de estas proteínas durante la infección por CHIKV. Finalmente, se determinó que las proteínas estructurales y no estructurales de CHIKV son blancos de ubiquitinación. Nuestros resultados demostraron como el virus chikungunya requiere de los distintos componentes del sistema ubiquitina-proteasoma para establecer una infección productiva. Este hallazgo tiene una fuerte implicación pues se encontró un factor celular clave asociado en el ciclo de replicación viral, y como éste puede ser postulado para el desarrollo de nuevas estrategias antivirales.Ítem Molecular and biological characterization of an Asian-American isolate of chikungunya virus(2021) Archila Hernández, Edwin Darío; Castellanos Parra, Jaime Eduardo; Calvo Tapiero, Eliana Patricia; Archila Hernández, Edwin Darío [0000-0002-8633-8031]Background: Chikungunya virus is an arthropod-transmitted virus that causes chikungunya fever, a disease characterized by severe muscle and joint pain. The virus was introduced to the Americas in 2013 and caused approximately 2.7 million cases during the subsequent two years. The lack of knowledge regarding the biological behavior of the viral strains circulating during the outbreak has motivated the characterization of a virus isolated in Colombia in 2015. Methods: The full genomes of isolated and cultured viruses were obtained using next-generation sequencing. The infective and replicative capacities and their impact on viability were evaluated in three different cell lines, HEK293T, Huh-7, and MRC-5, to describe the biological behavior. The infection percentages were determined by flow cytometry, and cytopathic effects were evaluated by conducting a resazurin fluorescent metabolic assay. The viral yield of each cell line was quantified by conducting a virus plaque formation assay. The virus proteins and RNA kinetics were then evaluated by western blotting and Reverse transcription -qPCR. Results: The COL7624 isolate was clustered with other American and Caribbean sequences in the Asian American lineage. The T669A substitution in E2 distinguished it from other Colombian sequences reported in 2014. After 48 hpi, the three cell lines analyzed reached infection percentages exceeding 65%, generating a high load of infectious viral progeny. The infection kinetics indicated that the replication peak occurred around 24 hpi, although gRNA could be detected in the supernatant from 4 hpi onwards. Infection caused the overexpression of interferon and proinflammatory cytokines, such as IL-1, TNF-α, and IL-8. Conclusions: The COL7624 isolate exhibited a high infective and replicative capacity and induced the activation of the cellular immune response, similar to isolates belonging to the other genotypes.