Estandarización de un método molecular para la detección de Candida albicans
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2024-05
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Resumen
Antecedentes: La presencia de Candida albicans en la mucosa oral varía en
individuos sanos y aumenta en aquellos con tratamientos de corticoides,
enfermedades crónicas o inmunosupresión. El diagnóstico suele basarse en
manifestaciones clínicas sin confirmación etiológica. Las pruebas bioquímicas
enfrentan dificultades para distinguir entre especies de Candida debido a
similitudes metabólicas, lo que subraya la necesidad de métodos moleculares
precisos como la qPCR, comparados con métodos establecidos como RapID
Yeast y MALDI- TOF-MS. Objetivo: Estandarizar un método molecular para
detectar Candida albicans en muestras orales. Métodos: Se evaluaron 45
aislamientos de levaduras de la cavidad oral almacenadas en el cepario de UIBO.
Se sembraron en Agar Sabouraud y se extrajo DNA usando el kit Quick-DNATM
Fungal/Bacterial Miniprep. La identificación se realizó mediante RapID Yeast
Plus, MALDI-TOF-MS y qPCR, y se analizó la concordancia usando estadística
descriptiva y la prueba de Kappa de Cohen en STATA. Resultados: De los 45
aislamientos, la qPCR identificó 43 (95.5%) como Candida albicans. RapID Yeast
Plus identificó 35 aislamientos (77.7%), y MALDI-TOF-MS identificó 34
(75.5%). RapID Yeast Plus también identificó Candida tropicalis (17.7%) y
Candida glabrata (4.44%). MALDI-TOF-MS identificó Candida tropicalis
(11.11%), Candida glabrata (8.8%), Candida dubliniensis y Saccharomyces
cerevisiae (2.22% cada una). Aunque el porcentaje de acuerdo fue alto entre los
métodos, el coeficiente Kappa varió significativamente, mostrando una
concordancia moderada entre RapID Yeast Plus y MALDI-TOF-MS (k=0.48) y
baja entre qPCR y los otros métodos (k=0.10). Conclusión: La estandarización
de la qPCR mejoró la identificación de Candida albicans, optimizando el
diagnóstico y tratamiento de infecciones por esta levadura en pacientes.
Descripción
Abstract
Background: Candida albicans in the oral mucosa varies in healthy individuals
and increases in those with corticosteroid treatments, chronic diseases, or
immunosuppression. The diagnosis is usually based on clinical manifestations
without etiological confirmation. Biochemical tests face difficulties
distinguishing between Candida species due to metabolic similarities,
underscoring the need for precise molecular methods such as qPCR compared
to established methods such as RapID Yeast and MALDI-TOF-MS. Objective:
Standardize a molecular method to detect Candida albicans in oral samples.
Methods: 45 yeast isolates were evaluated from the oral cavity stored in the
UIBO strain collection. They were plated on Sabouraud Agar, and DNA was
extracted using the Quick-DNATM Fungal/Bacterial Miniprep kit. Identification
was performed using RapID Yeast Plus, MALDI-TOF-MS, and qPCR, and
agreement was analyzed using descriptive statistics and Cohen's Kappa test in
STATA. Results: Of the 45 isolates, qPCR identified 43 (95.5%) as Candida
albicans. RapID Yeast Plus identified 35 isolates (77.7%), and MALDI-TOF-MS
identified 34 (75.5%). RapID Yeast Plus also identified Candida tropicalis
(17.7%) and Candida glabrata (4.44%). MALDI-TOF-MS identified Candida
tropicalis (11.11%), Candida glabrata (8.8%), Candida dubliniensis and
Saccharomyces cerevisiae (2.22%). Although the percentage agreement was
high between the methods, the Kappa coefficient varied significantly, showing
moderate agreement between RapID Yeast Plus and MALDI-TOF-MS (k=0.48)
and low agreement between qPCR and the other methods (k=0.10).
Conclusions: The standardization of qPCR improved the identification of
Candida albicans, optimizing the diagnosis and treatment of infections caused
by this yeast in patients.
Palabras clave
Candida albicans, qPCR, RapID Yeast, MALDI TOF-MS
Keywords
Candida albicans, qPCR, RapID Yeast, MALDI TOF-MS