Examinando por Autor "Morales, Liliana"
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Ítem Anticuerpos policlonales contra la proteína recombinante NS3 del virus del dengue(Instituto Nacional de Salud, 2017) Castellanos, Jaime; Morales, Liliana; Velandia-Romero, Myriam Lucía; Calderón-Peláez, María Angélica; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Castellanos, Jaime [0000-0003-1596-8383]; Velandia-Romero, Myriam Lucía [0000-0002-3340-7304]; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Introducción. El dengue es una enfermedad causada por uno de los cuatro serotipos del virus del dengue (DENV) y es endémica en, aproximadamente, 130 países. Su incidencia ha aumentado notablemente en las últimas décadas, así como la frecuencia y la magnitud de los brotes. A pesar de los esfuerzos, no existen tratamientos profilácticos ni terapéuticos contra la enfermedad y, en ese contexto, el estudio de los procesos que gobiernan el ciclo de infección del DENV es esencial para desarrollar vacunas o terapias antivirales. Una de las moléculas del DENV más prometedoras es la proteína no estructural 3 (NS3), la cual es indispensable para la replicación viral y es uno de los principales blancos inmunológicos durante la infección. Objetivo. Producir anticuerpos policlonales para contribuir a los futuros estudios sobre las interacciones entre la proteína NS3 y otras proteínas celulares. Materiales y métodos. Se expresaron dos proteínas recombinantes del dominio helicasa de NS3 del DENV de serotipo 2, las cuales se emplearon para inmunizar ratas y producir anticuerpos policlonales. Resultados. Los anticuerpos producidos fueron útiles en ensayos de Western blot e inmunofluorescencia y se reportó por primera vez un anticuerpo policlonal anti-NS3 que permitió la inmunoprecipitación de la proteína viral y la detecta con Western blot sin necesidad de inducir sobreexpresión de NS3 o de usar extractos de células marcados metabólicamente con radioisótopos. Conclusión. Las proteínas recombinantes expresadas y los anticuerpos producidos constituyen herramientas valiosas para estudiar procesos infecciosos del DENV que involucren a la proteína NS3 y evaluar pruebas dirigidas a interferir las funciones de esta proteína.Ítem Comparación sistemática de estrategias para lograr la expresión soluble de proteínas recombinantes de plasmodium falciparum en E. coli(Springer) Morales, Liliana; Hernández, Paula; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Se utilizaron construcciones que contenían secuencias codificantes parciales de miosina A, miosina B y proteína asociada a glideosoma (50 kDa) de Plasmodium falciparum para desafiar varias estrategias diseñadas para mejorar la producción y solubilidad de proteínas recombinantes en Escherichia coli. Los ensayos se llevaron a cabo induciendo la expresión en un cultivo en fase logarítmica tardía, optimizando la concentración del inductor, reduciendo la temperatura de crecimiento de los cultivos inducidos y complementando los aditivos en el tampón de lisis. Además, las proteínas recombinantes se expresaron como proteínas de fusión con tres etiquetas diferentes (6His, GST y MBP) en cuatro cepas de E. coli diferentes. Descubrimos que la única condición que producía proteínas solubles consistentemente era el uso de MBP como etiqueta de fusión, que se convirtió en una herramienta valiosa para detectar las proteínas utilizadas en este estudio y no causó ninguna interferencia en los ensayos de interacción proteína-proteína (Far Western Blot). Además, encontramos que la cepa BL21-pG-KJE8 no mejoró la solubilidad de ninguna de las proteínas recombinantes producidas, mientras que la cepa BL21-CodonPlus (DE3) -RIL mejoró la expresión de algunas de ellas independientemente del contenido de codones raros. Las proteínas con codones raros que se encuentran en frecuencias altas (> 10%) se expresaron de manera eficiente en cepas que no complementan los ARNt de estos tripletes. mientras que la cepa BL21-CodonPlus (DE3) -RIL mejoró la expresión de algunos de ellos independientemente del contenido de codones raros. Las proteínas con codones raros que se encuentran en frecuencias altas (> 10%) se expresaron de manera eficiente en cepas que no complementan los ARNt de estos tripletes. mientras que la cepa BL21-CodonPlus (DE3) -RIL mejoró la expresión de algunos de ellos independientemente del contenido de codones raros. Las proteínas con codones raros que se encuentran en frecuencias altas (> 10%) se expresaron de manera eficiente en cepas que no complementan los ARNt de estos tripletes.Ítem Determinación del ensamblaje genético de aislados axénicos colombianos de Giardia intestinalis(Universidad del Norte, 2016) Chaparro-Olaya, Jacqueline; Hernández Atehortua, Paula Constanza; Morales, Liliana; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Objetivo: Genotipificar muestras de Giardia aisladas de pacientes de tres regiones geográficas de Colombia. Materiales y métodos: Se examinaron 22 aislados de G. intestinalis, los primeros descritos cultivados axénicamente de origen colombiano por medio del análisis del polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) del gen glutamato deshidrogenasa (gdh). Resultados y conclusión: El patrón del RFLP mostró que todos los aislados pertenecían al ensamblaje A, específicamente al AI; resultado confirmado por secuenciación. Con este estudio se pretende contribuir al conocimiento de los genotipos circulantes de Giardia intestinalis en Colombia.Ítem Ensamblaje y liberación del virus dengue: Controversia sobre la participación de la proteína alix(Universidad nacional de colombia, 2019) Bueno Angarita, Claudia Liliana; Morales, Liliana; Velandia-Romero, Myriam Lucía; Calderón-Peláez, María Angélica; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Velandia-Romero, Myriam Lucía [0000-0002-3340-7304]; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Algunos virus envueltos usurpan la maquinaria celular ESCRT (complejo de clasificación endosomal requerido para el transporte) para llevar a cabo funciones como la transcripción, la traducción, el ensamblaje y la liberación de partículas virales desde las células huésped. Aunque esta estrategia ha sido estudiada principalmente en retrovirus, son varios los virus envueltos que la usan. El objetivo del trabajo fue explorar la participación de una proteína accesoria de ESCRT, la proteína Alix, en la transcripción, traducción, ensamblaje y liberación del virus dengue (DENV), así como su interacción con la proteína viral NS3. Células A549 infectadas con DENV2 fueron tratadas con pequeños ARN de interferencia (siRNA) para disminuir la expresión (“knock-down”) de la proteína Alix. Simultáneamente, se obtuvo una línea A549 que expresaba una proteína NS3 recombinante y sobre este sistema se hicieron ensayos de inmunoprecipitación y “pull-down” para detectar interacción entre NS3 y Alix. Los resultados mostraron que el “knock-down” de Alix no tuvo efecto notable en la transcripción o la traducción viral, pero sí en el ensamblaje y la liberación de DENV2, mientras que los ensayos de “pull-down” revelaron la interacción entre NS3 y Alix. La participación de Alix en la producción de DENV2 y su interacción con NS3 constituyen un potencial blanco para el diseño de estrategias dirigidas a controlar la propagación de DENV.Ítem Exploring Blastocystis genetic diversity in rural schoolchildren from Colombia using next-generation amplicon sequencing reveals significant associations between contact with animals and infection risk(Springer Nature, 2023) Hernández, Paula C.; Maloney, Jenny G.; Molokin, Aleksey; George, Nadja S.; Morales, Liliana; Chaparro Olaya, Jacqueline; Santin, Monica; Hernández, Paula C. [0000-0002-2136-7755]; Maloney, Jenny G. [0000-0002-6405-883X]; Molokin, Aleksey [0000-0002-4571-7641]; George, Nadja S. [0000-0001-8681-3544]; Morales, Liliana [0000-0002-0906-5383]; Chaparro Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]; Santin, Monica [0000-0002-1386-6255]Blastocystis es un protista intestinal común con una distribución mundial en humanos y muchos otros animales. Sin embargo, el estatus de Blastocystis como patógeno, los factores de riesgo asociados a su transmisión y su potencial zoonótico siguen sin estar bien definidos. Aquí, exploramos la diversidad del subtipo (ST) y los factores de riesgo potenciales para la infección por Blastocystis en 98 niños de Apulo, Colombia. Las muestras fueron cribadas para Blastocystis mediante PCR, y la identificación de ST se realizó mediante secuenciación de amplicones de próxima generación (NGS). Las asociaciones entre la presencia de Blastocystis y ST individuales y las variables sociodemográficas se evaluaron mediante análisis de regresión logística. Setenta y una muestras (72,4%) fueron positivas para Blastocystis, y la NGS reveló la presencia de cinco ST (ST1-ST5). ST1, ST2 y ST3 fueron comunes y se observaron en proporciones casi iguales (~ 40%), mientras que las muestras con ST4 (1,4%) y ST5 (5,6%) fueron comparativamente raras. También fue frecuente la presencia de ST mixtos en la misma muestra (28,2%). Las comparaciones entre niños de un mismo hogar revelaron que los perfiles de ST compartidos eran frecuentes, pero también se observó diversidad dentro de las unidades familiares. Los análisis de regresión logística arrojaron asociaciones significativas entre la presencia de Blastocystis, subtipos individuales o subtipos mixtos para varias variables. Curiosamente, la presencia de animales fue una de las asociaciones significativas más comunes. En conjunto, estos datos representan un importante paso adelante en la comprensión tanto de las rutas potenciales como de los factores de riesgo que pueden influir en la transmisión de Blastocystis, y serán útiles para dar forma a futuros estudios que traten de aclarar las relaciones entre los ST, la patogenicidad y la transmisión zoonótica.Ítem Frequency and distribution of blastocystis sp. subtypes in patients with spondyloarthritis in bogotá, colombia(Elsevier Ltd, 2021) Hernández, Paula C.; Morales, Liliana; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Bello-Gualtero, Juan Manuel; Beltrán-Ostos, Adriana; De Avila, Juliette [https://orcid.org/0000-0002-2441-7084]; Bautista Molano, Wilson [https://orcid.org/0000-0003-0684-9542]; Romero-Sánchez, Consuelo [https://orcid.org/0000-0002-6973-7639]Ítem Intestinal parasitic infections and associated factors in children of three rural schools in Colombia. A cross-sectional study(Public Library of Science, 2019) Hernández Atehortua, Paula Constanza; Morales, Liliana; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Sarmiento-Senior, Diana; Jaramillo, Juan Felipe; Ordoñez-Sierra, Gustavo Adolfo; Cortés Muñoz, Fabián; Sánchez, Lizeth K.; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]; Jaramillo, Juan Felipe [0000-0001-6417-8578]; Sarmiento-Senior, Diana [0000-0002-9959-3226]; Ordoñez-Sierra, Gustavo Adolfo [0000-0003-2178-5946]Ítem Microbioma intestinal diferencial en pacientes con espondiloartritis asociada a colonización de Blastocystis(Laboratorio de Parasitología Molecular, Vicerrectoría de Investigaciones, Universidad El Bosque, Edificio O. Segundo Piso, Avenida Carrera 9 #131A-02, Bogotá, Colombia, 2023) Nieto Clavijo, Carlos; Morales, Liliana; Márquez Ortiz, Ricaurte Alejandro; Romero Sánchez, Consuelo; Ramos Casallas, Alejandro; Escobar Pérez, Javier; Bautista Molano, Wilson; Bello Gualtero, Juan Manuel; Chaparro Olaya, Jacqueline; Nieto Clavijo, Carlos [0000-0002-8806-3270]; Márquez Ortiz, Ricaurte Alejandro [0000-0002-7188-6158]; Romero Sánchez, Consuelo [0000-0002-6973-7639]; Ramos Casallas, Alejandro [0000-0002-8742-7845]; Escobar Pérez, Javier [0000-0002-0432-6978]; Bautista Molano, Wilson [0000-0003-0684-9542]; Bello Gualtero, Juan Manuel [0000-0003-1982-124X]; Chaparro Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]El papel de Blastocystis en la salud intestinal es una controversia abierta, y poco se sabe sobre el efecto potencial de este microorganismo en enfermedades autoinflamatorias como la espondiloartritis (EspA). Aquí, analizamos el microbioma intestinal de 36 pacientes con SpA y 13 individuos de control y demostramos que la riqueza, diversidad y composición taxonómica entre estos dos grupos son diferentes. También demostramos que la colonización por Blastocystis en individuos de control aumenta la riqueza y diversidad del microbioma intestinal, mientras que en pacientes con SpA no parece tener ningún impacto. Esto puede reflejar un papel potencial de Blastocystis en esculpir la arquitectura del microbioma intestinal en individuos de control, mientras que en sujetos con SpA, La modulación del microbioma puede estar gobernada por factores dependientes de la enfermedad que Blastocystis no puede superar. En cuanto a la caracterización taxonómica, los pacientes con EspA colonizados por Blastocystis mostraron aumentos significativos en el filo Pseudomonadota, clase Gammaproteobacteria, familia Succinivibrionaceae y género Succinivibrio. Simultáneamente, hubo aumentos significativos en la clase Bacilli, orden Lactobacillales, familias Lactobacillaceae y Clostridiaceae, y géneros Lactobacillus y Clostridium en pacientes con EspA no colonizados. Por otro lado, el análisis PICRUSt en pacientes con SpA positivas para Blastocystis mostró elevaciones en las vías que pueden mejorar las capacidades antioxidantes y aliviar la inflamación intestinal. mientras que los pacientes con SpA negativa para Blastocystis mostraron cambios significativos en las vías que promueven la división/proliferación celular y pueden conducir a cambios mayores en el microbioma intestinal. Nuestros análisis nos llevan a creer que estos cambios en el microbioma intestinal de los pacientes con SpA pueden desencadenar mecanismos de protección como respuesta inicial a la inflamación en un intento de restablecer el equilibrio en el entorno intestinal. © 2023, Springer Nature Limitado.Ítem Myosin B of plasmodium falciparum (PfMyoB): in silico prediction of its three-dimensional structure and its possible interaction with MTIP(Springer, 2017) Hernández, Paula C.; Morales, Liliana; Castellanos, Isabel C.; Wasserman, Moisés; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]