Maestría en Ciencias Básicas Biomédicas

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https://hdl.handle.net/20.500.12495/158

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Examinando Maestría en Ciencias Básicas Biomédicas por Autor "Calderón Peláez, María Angélica"

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    Evaluación in vitro de la integridad de la barrera hematoencefálica y su alteración causada por el virus dengue
    (2014) Calderón Peláez, María Angélica; Velandia-Romero, Myriam Lucía; Castellanos, Jaime; Calderón Peláez, María Angélica [0000-0003-0788-0795]; Castellanos, Jaime [0000-0003-1596-8383]; Velandia-Romero, Myriam Lucía [0000-0002-3340-7304]
    El sistema nervioso (SN), está protegido por una barrera de difusión celular conocida como Barrera Hematoencefálica (BHE), compuesta por diferentes tipos de células que limitan el paso de moléculas desde los capilares hacia el parénquima cerebral, lo cual garantiza la homeostasis del tejido. A pesar de esto, algunas moléculas y agentes infecciosos logran atravesar la BHE e ingresar al tejido nervioso para inducir graves daños en la fisiología de este. Dentro de los patógenos que logran alterar la BHE e infectar el tejido nervioso, se encuentran algunos miembros de la familia flaviviridae típicamente neurotrópicos, sin embargo el virus del dengue (DENV), un virus considerado no neurotrópico, puede infectar y alterar la fisiología del tejido nervioso ocasionando signos como encefalitis, parálisis y alteraciones motoras y cognitivas que pueden ser permanentes. Para comprender los cambios de tropismo y los factores neurológicos e inmunológicos asociados a la neuroinfección por DENV, en nuestro laboratorio se desarrolló un modelo de neuroinfección en ratones lactantes utilizando una cepa de virus neuroadaptado (D4MB-6), que infecta neuronas y otras células del tejido nervioso e induce la alteración de la BHE en ratones lactantes. Por lo tanto, el presente proyecto buscó evaluar en un modelo de BHE in vitro, si la alteración de la permeabilidad de la barrera endotelial cerebrovascular asociada a la infección con el DENV-4 neuroadaptado o no, favorece el paso de virus libre o asociado a células del sistema inmune lo cual, permitiría la infección y dispersión viral en el tejido nervioso. Para esto, se estableció un modelo de BHE in vitro en monocapa o co-cultivo utilizando cultivos primarios de endotelio cerebrovascular con o sin astrocitos obtenidos a partir de cerebros de ratones lactantes, siendo únicamente las células endoteliales susceptibles a la infección con el virus parental o D4MB-6. Los resultados obtenidos mostraron en ambos modelos de BHE que a las 10 horas post-infección (hpi) con cada virus, hubo una disminución en los valores de resistencia transendotelial (TEER), asociada a un aumento en la permeabilidad. Adicionalmente en este mismo tiempo post infección se detectaron partículas virales infecciosas en la cámara inferior de los insertos, lo que sugiere que la infección ocasionó una alteración en la integridad de las células endoteliales, lo que permitió el paso paracelular de las partículas virales. Se encontró que la infección con el D4MB-6 indujo la relocalización -sin afectar la expresión-, de la proteína ZO-1 y un aumento en la expresión de los transcritos para las proteínas VCAM, PECAM, TNFα y MCP-1 comparado con lo observado durante la infección con el virus parental. Esto último está relacionado con un proceso de activación endotelial que al parecer favoreció el proceso de transmigración de monocitos/macrófagos J774 en ambos modelos de BHE estandarizados. Lo anterior convierte el proceso de alteración de la BHE en uno de los posibles mecanismos utilizados por el DENV para ingresar y dispersarse dentro del tejido nervioso.