Efecto de medios condicionados de células de carcinoma escamocelular oral VPH (+) y VPH (-) sobre el fenotipo y función de células dendríticas humanas
Cargando...
Fecha
2021-12-21
Título de la revista
Publicado en
Publicado por
URL de la fuente
Enlace a contenidos multimedia
ISSN de la revista
Título del volumen
Resumen
ANTECEDENTES: Pueden existir diferencias en el fenotipo y/o secreción de citocinas solubles por células dendríticas condicionadas con medios de cultivo de células tumorales de carcinoma escamocelular oral VPH (+) vs VHP (-). El objetivo de este estudio fue comparar el efecto de medios condicionados de células de carcinoma escamocelular oral VPH positivo (+) y VPH negativo (-) sobre el fenotipo y la función de Células dendríticas humanas.
MÉTODOS: Las células mononucleares de sangre periférica fueron obtenidas mediante un gradiente de Ficoll y separadas con perlas magnéticas acoplados a anticuerpos anti-CD14 haciendo una selección positiva. Estas células fueron resuspendidas y puestos en cultivo por 6 días junto al factor estimulador de colonias granulomonocíticas en presencia de Interleucina-4. Se utilizaron 2 líneas celulares de carcinoma escamocelular de lengua CAL-27 VPH (-) y SCC090 VPH (+), mantenidas en medio de cultivo tanto condicionado como sin condicionar durante 72 horas. Posteriormente las células dendríticas derivadas de monocitos obtenidas previamente se pusieron en contacto con estos medios condicionados de células de carcinoma escamocelular de lengua, en medios diluidos 1⁄2 y 1⁄4 por 4 horas. Se utilizó un control positivo de maduración agregando Lipopolisacárido de E. coli durante 18 horas. Todos los experimentos se realizaron en 4 réplicas biológicas, por último, se determinó la intensidad media de fluorescencia (IMF) por citometría de flujo, en donde se analizó el fenotipo, estado de maduración y perfil de citocinas. El cambio en la expresión de los marcadores fue determinado dividiendo la IMF de las células estimuladas con LPS sobre las no estimuladas con LPS. El valor p fue calculado usando un Mann Whitney test. *p < 0.05.
RESULTADOS: Las CDs condicionadas con MC proveniente de células tumorales VPH (-) y VPH (+), presentan tendencias a la disminución en la expresión de HLA-DR, PDL-1 y CD83, con respecto al control positivo con LPS, con un efecto más marcado para CD83 y HLA-DR en las CDs condicionadas con MC de SCC-090 (VPH+), en comparación con Cal27 (VPH-). En las CDs condicionadas con MC de SCC-090, se obtuvo un resultado estadísticamente significativo con una dilución 1⁄4. Las CDs en condiciones basales (sin estímulo), no secretan o secretan concentraciones bajas de las diferentes citocinas. Después del tratamiento con LPS (control positivo), se observa un incremento en la secreción de algunas citocinas como: IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, TGF-β e IL-10. Cuando estas, son condicionadas con medios provenientes de células tumorales Cal-27 (VPH (-)) y SSC-090 (VPH (+)), se observa un incremento en la secreción de dichas citocinas con respecto al control con LPS, sin diferencias marcadas entre las CDs condicionada con MC de SCC-090 (VPH+), y las Cal27 (VPH-). Se observa un incremento en la concentración de IL-1β en las CDs condicionadas con MC de Cal-27 con respecto a las de SSC-090, de manera estadísticamente significativa.
CONCLUSIÓN: Los medios condicionados provenientes de células tumorales VPH (+) exhiben una mayor afectación en la maduración y producción de citocinas por parte de las CDs a expensas de la disminución en la expresión de HLA-DR y CD83, en comparación con aquellas que fueron condicionadas con medios de la línea VPH (-), en donde se evidencia que en el microambiente tumoral con células escamosas infectadas con VPH, diferentes factores solubles pueden alterar la maduración y funcionalidad de las CDs en comparación con aquellas que no están infectadas, entre ellas destacamos que Las CDs condicionadas con MC de Cal-27 (VPH-) secretan mayores niveles de citocinas pro-inflamatorias IL-B e IFN-Y con respecto a las SCC- 090 (VPH (+)), por lo que su aumentó en medios VPH (-) representa un mayor grado de maduración y un efecto positivo en la funcionalidad de las CDs.
Descripción
Abstract
BACKGROUND: There may be differences in the phenotype and / or secretion of soluble cytokines by dendritic cells conditioned with HPV (+) vs HPV (-) oral squamous cell carcinoma tumor cells. The aim of this study was to compare the effect of HPV positive (+) and HPV negative (-) oral squamous cell carcinoma cells conditioned media on the phenotype and function of human dendritic cells.
METHODS: Peripheral blood mononuclear cells were obtained by means of a Ficoll gradient and separated with magnetic beads coupled to anti-CD14 antibodies making a positive selection. These cells were resuspended and placed in culture for 6 days together with the granulomonocytic colony stimulating factor in the presence of Interleukin-4. Two cell lines of squamous cell carcinoma of the tongue CAL-27 HPV (-) and SCC090 HPV (+) were used, maintained in both conditioned and unconditioned culture medium for 72 hours. Subsequently, the dendritic cells derived from monocytes obtained previously were put in contact with these conditioned media of squamous cell carcinoma cells of the tongue, in diluted media 1⁄2 and 1⁄4 for 4 hours. A positive maturation control was used by adding Lipopolysaccharide from E. coli for 18 hours. All the experiments were carried out in 4 biological replicates, finally the mean fluorescence intensity (MFI) was determined by flow cytometry, where the phenotype, maturation state and cytokine profile were analyzed. The change in the expression of the markers was determined by dividing the MFI of the cells stimulated with LPS over those not stimulated with LPS. The p-value was calculated using a Mann Whitney test. * p <0.05.
RESULTS: DCs conditioned with MC from HPV (-) and HPV (+) tumor cells, show decreasing tendencies in the expression of HLA-DR, PDL-1 and CD83, with respect to the positive control with LPS, with a more marked effect for CD83 and HLA-DR in SCC-090 (HPV +) MC- conditioned DCs, compared to Cal27 (HPV-). In SCC-090 MC-conditioned DCs, a statistically significant result was obtained with a 1⁄4 dilution. The DCs in basal conditions (without stimulation), do not secrete or secrete low concentrations of the different cytokines. After treatment with LPS (positive control), an increase in the secretion of some cytokines is observed, such as: IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, TGF-β and IL-10. When these are conditioned with media from tumor cells Cal-27 (HPV (-)) and SSC-090 (HPV (+)), an increase in the secretion of these cytokines is observed with respect to the control with LPS, without differences. Labeled between MC-conditioned DCs of SCC-090 (HPV +), and Cal27 (HPV-). An increase in the concentration of IL-1β is observed in DCs conditioned with MC of Cal-27 with respect to those of SSC-090, in a statistically significant way.
CONCLUSION: Conditioned media from HPV (+) tumor cells exhibit greater impairment in maturation and cytokine production by DCs at the expense of decreased expression of HLA-DR and CD83, compared to those that were conditioned with media from the HPV (-) line, where it is evidenced that in the tumor microenvironment with squamous cells infected with HPV, different soluble factors can alter the maturation and functionality of DCs compared to those that are not infected, including We highlight that DCs conditioned with MC of Cal-27 (HPV-) secrete higher levels of pro-inflammatory cytokines IL-B and IFN-Y with respect to SCC-090 (HPV (+)), therefore their increase in HPV (-) media represents a higher degree of maturation and a positive effect on the functionality of CDs.
Palabras clave
Células dendríticas, VPH, Medios condicionados, Carcinoma escamocelular, Fenotipo, Citocinas, Citometría de flujo
Keywords
Dendritic cells, HPV, Conditioned media, Squamous cell carcinoma, Phenotype, Cytokines, Flow cytometry