fimA genotypes and PFGE profile patterns in Porphyromonas gingivalis isolates from subjects with periodontiti

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Fecha

2009

Título de la revista

Publicado en

Oral Microbiology and Immunology, Vol. 24, Nro. 5, 2009, p. 423-426

Publicado por

John Wiley & Sons

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Resumen

Antecedentes y objetivos: Porphyromonas gingivalis se identifica con frecuencia para tipificar mediante la evaluación de los polimorfismos de fimA y, con menos frecuencia, mediante electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) debido a las complejidades técnicas de PFGE. Para comparar estas técnicas, genotipamos aislados clínicos de P. gingivalis en cuanto a (i) su tipo fimA y (ii) su perfil de restricción del genoma completo (análisis PFGE). Material y métodos: Se aislaron treinta y dos cepas de P. gingivalis de 16 pacientes con periodontitis no relacionados. Se aislaron dos cepas de cada paciente. Las cepas se sometieron a un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de tipificación fimA. Las cepas que no pudieron tipificarse mediante PCR se sometieron a secuenciación de todo el gen fimA. Los perfiles de PFGE de cepas clínicas se compararon mediante análisis bioinformático. Resultados: Siete de los 32 aislamientos no se pudieron tipificar mediante PCR, por lo que se secuenció todo su gen fimA. La secuenciación identificó cada cepa como perteneciente a un solo tipo de fimA. En un caso, la secuenciación del gen fimA no estuvo de acuerdo con el resultado obtenido mediante la tipificación por PCR de fimA. A excepción de un paciente, cada paciente presentó aislamientos portadores del mismo tipo fimA. Sin embargo, en tres pacientes, los aislamientos con el mismo tipo de fimA presentaron pulsotipos de PFGE diferentes. Conclusión: La tipificación de P. gingivalis mediante fimA PCR tiene limitaciones en la tipificación y el poder discriminatorio. Se necesita una técnica de tipificación para P. gingivalis que sea fácil de realizar pero que presente una capacidad de tipificación adecuada y poder discriminatorio si queremos comprender mejor la epidemiología de la enfermedad periodontal.

Descripción

Abstract

Background and objectives: Porphyromonas gingivalis is frequently identified to type by evaluation of fimA polymorphisms and less often by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) because of the technical intricacies of PFGE. To compare these techniques, we genotyped P. gingivalis clinical isolates as to (i) their fimA type and (ii) their whole genome restriction profile (PFGE analysis). Material and methods: Thirty-two P. gingivalis strains were isolated from 16 unrelated periodontitis patients. Two strains were isolated from each patient. Strains were subjected to a fimA-typing polymerase chain reaction (PCR) assay. Strains that could not be typed by PCR were submitted to sequencing of the entire fimA gene. The PFGE profiles of clinical strains were compared using bioinformatic analysis. Results: Seven of the 32 isolates were not typeable by PCR and so their entire fimA gene was sequenced. The sequencing identified each strain as belonging to a single fimA type. In one case, sequencing of the fimA gene did not agree with the result obtained using fimA PCR typing. With the exception of one patient, each patient presented isolates bearing the same fimA type. However, in three patients, isolates with the same fimA type presented different PFGE pulsotypes. Conclusion: The P. gingivalis typing using fimA PCR has limitations in typeability and discriminatory power. A typing technique for P. gingivalis that is easy to perform but that presents adequate typeability and discriminatory power is needed if we want to better understand the epidemiology of periodontal disease.

Palabras clave

Porphyromonas gingivalis, fimA, Electroforesis en gel de campo pulsado, Genotipado, Periodontitis

Keywords

Porphyromonas gingivalis, fimA, Pulsed-field gel electrophoresis, Genotyping, Periodontitis

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