Purificación de lipopolisacárido de Porphyromonas gingivalis libre de polisacáridos utilizando cromatografía de alta resolución Sephacryl S-200

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Gualtero D., Diego, Castellanos, J., Pérez G._2008.pdf (1015.57 KB)

Fecha

2008

Autores

Título de la revista

Publicado en

Acta Biológica Colombiana, 0120-548X, Vol. 13, Nro. 3, 2008, pp. 148-160

Publicado por

Universidad Nacional de Colombia

URI

https://hdl.handle.net/20.500.12495/1472

URL de la fuente

https://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/17451

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Resumen

El objetivo de este trabajo fue mejorar un método estándar para la purificación de lipopolisacárido (LPS) de Porphyromonas gingivalis libre de polisacáridos usando una estrategia de extracción, digestión enzimática y cromatografía de alta resolución. La bacteria P. gingivalis se cultivó en condiciones de anaerobiosis y se hizo extracción de las membranas con el método de fenol-agua. Luego de una digestión enzimática (DNAsa, RNAsa y proteasa) se separó el extracto por filtración por gel con Sephacryl S-200. La muestra purificada se caracterizó por electroforesis en gel de acrilamida con tinción de plata y por el método Purpald se detecto el ácido 2-ceto-3-desoxioctu- losónico (KDO). Se obtuvo una preparación libre de ácidos nucleicos, proteínas y polisacáridos. La separación por cromatografía fue de alta resolución al permitir la obtención de dos picos con diferentes componentes. El protocolo de purificación nos permitió obtener LPS de P. gingivalis con alto grado de pureza, el cual podría ser usado en próximos ensayos para evaluar su función en ensayos in vitro e in vivo; así como iniciar la obtención de LPS de otras bacterias períodontopáticas, con el fin de investigar la asociación de enfermedad períodontal con enfermedades cardiovasculares.

Descripción

Abstract

The aim of this work was to improve a standard methodology to purify Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide (LPS) using a protocol of extraction, enzymatic digestión and high resolution chromatography. P. gingivalis bacteria was cultured in anaerobiosis, their membranes were extracted using the phenol-water method, then subjected to DNAse, RNAse and protease digestion and finally, the extract was separated by chromatography using Sephacryl S-200. The purified extract was characterized by silver staining after polyacrylamide gel electrophoresis and 2-keto-3-deoxioctanoic acid (KDO) was detected using the Purpald’s method. A preparation free of nucleic acid-, protein- or polysaccharides was obtained. The chromatographic separation showed high resolution since there was two discrete peaks with different components. The purification protocol allowed us to obtain a highly purified P. gingivalis LPS which could be used in future tests to evaluate its behavior in vitro and in vivo and elucidate its function, as well as to obtain LPS from other períodontopatic bacteria to address the association of períodontal disease with cardiovascular diseases.

Palabras clave

Periodontitis, Lipopolisacáridos, Endotoxinas, Cromatografía

Keywords

Períodontitis, Lipopolysaccharide, Endotoxin, Chromatography

Temáticas

Enfermedades periodontales
Técnicas de química analítica
Glicoconjugados

Citación

Colecciones

Artículos