Evaluación in vitro del efecto de Pueraria lobata y Schisandra chinensis en queratinocitos tumorales transformados por VPH-18
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2020
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Resumen
Antecedentes: La infección por el virus del papiloma humano de alto riesgo (HR-HPV) es un factor de riesgo para el desarrollo de neoplasias malignas como el cáncer oral (CO). Pueraria lobata y Schisandra chinensis son plantas utilizadas en la medicina tradicional china, las cuales han demostrado poseer efectos antitumorales en diferentes tipos de cáncer. Sin embargo, no se ha evaluado su efecto sobre la expresión de los oncogenes del VPH y su impacto sobre queratinocitos transformados. Objetivo: Evaluar el efecto citotóxico y anti-proliferativo de Pueraria lobata y Schisandra chinensis sobre queratinocitos tumorales transformados por VPH-18. Materiales y métodos: Se evaluó la citotoxicidad de ambos extractos sobre células HeLa tratadas en un rango de concentraciones entre 0 – 5000 ug/mL. Se evaluó la viabilidad celular por medio del ensayo de resazurina. Se determinaron cambios en la expresión génica de las oncoproteínas E6 y E7 y de los genes Bcl-1, E2F-1 y p53 sobre células HeLa al ser estimuladas por ambos extractos a concentraciones de 0.1, 1 y 10 ug/mL durante 24 y 48 horas por medio de PCR en tiempo real (q-PCR). Se evaluó la distribución en el ciclo celular de células HeLa tratadas con ambos extractos a concentraciones de 0.1, 1 y 10 ug/mL durante 24 y 48 horas por medio de citometría de flujo. Resultados: Los extractos de P. lobata y S. chinensis no poseen efecto citotóxico sobre células HeLa a las concentraciones evaluadas. Las concentraciones inhibitorias 50 (IC50) estuvieron para P. lobata en 3294 ug/ml y S. chinensis en 1478 ug/ml. El extracto de P. lobata inhibe la expresión génica de E6 a 0.1 y 10 ug/ml a 24 horas de estímulo. El extracto de S. chinensis inhibe la expresión génica de E6 a 1 ug/ml a 48 horas de estímulo. Ambos extractos aumentan la expresión de Bcl-2, E2F-1 y p53 a 0.1 y 10 ug/ml. El extracto de P. lobata a 0,1 y 10 μg/mL a 24 horas de estímulo y de S. chinensis a 0,1 μg/mL a 48 horas poseen un efecto antiproliferativo mediante la detención del ciclo celular en las fases G0/G1 y S respectivamente sobre células HeLa. Conclusión: Los extractos P. lobata y S. chinensis poseen efecto antiproliferativo sobre células HeLa. Investigaciones futuras son necesarias para determinar a qué compuesto de los extractos evaluados se le atribuyen estos efectos.
Descripción
Abstract
Background: The infection due to human papilloma virus is of high risk (HR-HPV) for the development of malign oral neoplasia (OC). Pueraria lobata y Schisandra chinensis are plants used in traditional Chinese medicine which have shown anti-tumour effects in different types of cancer. However, their effect has not been evaluated on the expression of HPV oncogenes and their impact on transformed keratinocytes. Objective: to evaluate the cytotoxic and anti-proliferative effect of Pueraria lobata and Schisandra chinensis on transformed tumour keratinocytes by HPV-18. Materials and methods: The cytotoxicity of both extracts on HeLa cells treated with a range of concentrations from 0 ug/mL. to 5000 ug/mL. was evaluated. Viability was assessed by means of the resazurin trial. Gene expression changes of the E6 and E7 oncoproteins and Bcl-1, E2F-1 and p53 genes were determined on HeLa cells stimulated by both extracts with concentrations of 0.1 ug/mL and 10 ug/mL during 24 hours and 48 hours by means of real-time PCR (q-PCR). Distribution of the HeLa cellular cycle treated with both extracts with concentrations of 0.1 ug/mL and 10 ug/mL during 24 hours and 48 hours by means flow cytometry. Results: The extracts of P. lobata y S. chinensis with the evaluated concentrations do not present a cytotoxic effect on HeLa cells. Inhibiting concentrations 50 (IC50) for P. lobata were 3294 ug/ml and S. chinensis were 1478 ug/ml. The P. lobata extract inhibits gene expression of E6 at 0.1 ug/ml and 10 ug/ml 24 hours after stimulation. S. chinensis inhibits gene expression of E6 with 1 ug/ml 48 hours after stimulus. Both extracts increase the expression of Bcl-2, E2F-1 and p53 with 0.1 ug/ml and 10 ug/ml. The P. lobata with 0.1 ug/ml and 10 μg/mL 24 hours after stimulus and S. chinensis with 0.1 μg/mL 48 hours after present an anti-proliferative effect by means of cellular cycle detection in the G0/G1 and S phases respectively. Conclusion: The P. lobata y S. chinensis possess an anti-proliferative effect over HeLa cells. Future research is necessary in order to determine which compound has the mentioned effects.
Palabras clave
Células HeLa, Cáncer oral, Pueraria, Schisandra
Keywords
HeLa cells, Oral cancer, Pueraria, Schisandra