Alteración en la permeabilidad y resistencia endotelial inducida por la proteína de alta movilidad del grupo 1 (HMGB-1) presente en suero de individuos con diagnóstico confirmado de dengue

Resumen

Las células endoteliales conforman la barrera que separa el torrente sanguíneo de tejidos y órganos. Previamente se ha reportado que la infección por el virus del dengue (DENV) puede inducir una disfunción endotelial en diferentes tejidos, lo cual ha sido asociado con la presencia de algunas citoquinas y quimioquinas a nivel circulatorio. Por otro lado, proteínas como la HMGB-1 puede ocasionar una alteración endotelial en patologías inflamatorias (como sepsis, enfermedad respiratoria aguda), o tras la infección con virus como dengue y virus del nilo occidental, entre otros. Sin embargo, se desconoce si la producción de esta proteína durante la infección por DENV está involucrada en el proceso de disfunción endotelial que se puede dar tras complicaciones de la enfermedad. Por lo anterior, en este estudio experimental, se evaluó si la proteína HMGB-1, presente en el suero de individuos con diagnóstico confirmado de dengue, induce alteraciones en un modelo in vitro de barrera endotelial. Para esto se utilizaron sueros de pacientes con diagnóstico confirmado de dengue (previamente obtenidas y analizadas para este y otros virus), a los cuales se les cuantificó la concentración de la proteína HMGB-1 por ELISA. Después de analizar los resultados obtenidos, se escogieron 3 sueros con altas y 3 con bajas concentraciones de la proteína en cuestión y se pusieron en contacto con células endoteliales polarizadas sobre insertos porosos (transwell®). Una vez establecido el modelo de barrera, se realizaron mediciones de permeabilidad e integridad de la monocapa endotelial en diferentes tiempos post-exposición de las células a los sueros. Los resultados obtenidos fueron analizados utilizando el software de análisis estadístico y graficación Graph Pad, el cual permitió evidenciar un aumento de la resistencia transendotelial con valores bajos de HMGB1 y así mismo, una disminución de la resistencia con concentraciones altas en suero de HMGB1.

Descripción

Abstract

Endothelial cells form the barrier that separates blood flow from tissues and organs. Previously, there has been reported that the infection caused by the virus of dengue (DENV) can induce an endothelial disfunction in different tissues, which has been associated to the presence of cytokines and chemokines in the circulatory system. On the other hand, proteins like HMGB-1 can cause an endothelial disfunction in other inflammatory pathologies (such as sepsis, acute respiratory infection) or after the infection caused by dengue or West Nile virus, among others. Despite this, it is unknown whether the production of this protein during the infection of DENV is involved in the process of endothelial disfunction that can occur after complications caused by the disease. Consequently, this experimental study pretended to evaluate whether HMGB-1 protein present in serum of individuals with confirmed diagnosis of dengue induces alteration in an in vitro model of an endothelial barrier. For this purpose, serums of patients with confirmed diagnosis of dengue were used (previously obtained and analyzed for this and other viruses), to which the concentration of the HMGB-1 protein was quantified by the ELISA method. After analyzing the obtained results, there were 3 high concentration and 3 low concentration serums of the protein chosen and they were put in contact with the polarized endothelial cells into culture plates (transwell®). Once the barrier model was established, permeability and integrity of the endothelial monolayer were measured in different time after the exposure to the serum. Obtained results were analyzed using the statistical analysis software and graphic by Graph Pad, which allowed to show the increased transendothelial resistance with low HMGB1 values and a decrease in resistance with low serum concentrations of HMGB1.

Palabras clave

Células endoteliales, DENV, HMGB-1, Integridad vascular

Keywords

Vascular integrity, HMGB-1, DENV, Endothelial cells

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