Role of the transmembrane domain of the VanT serine racemase in resistance to vancomycin in Enterococcus gallinarum BM4174

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dc.contributor.authorArias, César A.
dc.contributor.authorPeña, Julieta
dc.contributor.authorPanesso, Diana
dc.contributor.authorReynolds, Peter E.
dc.contributor.orcidPanesso, Diana [0000-0002-4049-9702]
dc.date.accessioned2021-02-15T14:55:17Z
dc.date.available2021-02-15T14:55:17Z
dc.date.issued2003
dc.description.abstractEnterococcus gallinarum, BM4175 (un derivado susceptible a vancomicina de BM4174 obtenido por inactivación por inserción de vanC-1) se transformó con construcciones de plásmido pCA10 (que contiene los genes necesarios para la resistencia, vanC-1-XYc-T), pJP1 (con un fragmento que falta el ADN que codifica la región transmembrana de VanT, -vanC-1-XYc-T Δ2-322 -) y con plásmidos que contienen fragmentos que codifican los dominios transmembrana (mvanT 1-323 ) o racemasa (svanT 323-698 ) de VanT bajo el control de un promotor constitutivo. Los precursores de peptidoglicano acumulados se midieron en todas las cepas en presencia de L-Ser, D-Ser (50 mM) o en ausencia de cualquier suplemento de crecimiento. Captación de 0.1 mM L- [ 14C] serina también se determinó en BM4174, BM4175 y BM4175 / pCA10. La resistencia a la vancomicina se restauró en BM4175 transformado con pCA10 (C-1-XYc-T), y el perfil de los precursores de peptidoglicano fue similar al de E. gallinarum de tipo salvaje, BM4174. Transformación de E. gallinarum BM4175 con el plásmido pJP1 (vanC-1-XYc-T Δ2-322) dio lugar a: (i) las CIM de vancomicina permanecieron dentro de los niveles de susceptibilidad (≤4 mg / L) en ausencia de cualquier suplemento de crecimiento, pero aumentaron a 8 mg / L cuando se añadió L-Ser o D-Ser al medio; y (ii) las cantidades relativas de UDP-MurNAc-pentapéptido [D-Ser] y precursores tetrapéptidos acumulados disminuyen sustancialmente en comparación con BM4175 / pCA10 y BM4174. El efecto sobre la aparición del tetrapéptido pareció depender del huésped, ya que estaba presente una cantidad sustancial cuando la misma construcción de plásmido pJP1 (vanC-1-XYc-T 2-322 ) se electroporó en Enterococcus faecalis JH2-2. La captación de L- [ 14 C] Ser a 240 s se redujo en ~ 40% en BM4175 en comparación con BM4174. El plásmido pCA10 (C-1-XY c -T) restauró la captación de L- [ 14C] Ser a 180 y 240 s en BM4175. Los resultados sugieren que es probable que el dominio transmembrana de VanT esté implicado en el transporte de L-Ser y que, en su ausencia, el fenotipo de resistencia está comprometido.spa
dc.description.abstractenglishEnterococcus gallinarum, BM4175 (a vancomycin-susceptible derivative of BM4174 obtained by insertional inactivation of vanC-1) was transformed with plasmid constructs pCA10 (containing the genes necessary for resistance, vanC-1-XYc-T), pJP1 (with a fragment lacking the DNA encoding the transmembrane region of VanT, -vanC-1-XYc-TΔ2-322-) and with plasmids containing fragments encoding either the transmembrane (mvanT1-323) or racemase (svanT323-698) domains of VanT under the control of a constitutive promoter. Accumulated peptidoglycan precursors were measured in all strains in the presence of L-Ser, D-Ser (50 mM) or in the absence of any growth supplement. Uptake of 0.1 mM L-[14C]serine was also determined in BM4174, BM4175 and BM4175/pCA10. Vancomycin resistance was restored in BM4175 transformed with pCA10(C-1-XYc-T), and the profile of peptidoglycan precursors was similar to wild-type E. gallinarum, BM4174. Transformation of E. gallinarum BM4175 with plasmid pJP1(vanC-1-XYc-TΔ2-322) resulted in: (i) vancomycin MICs remaining within susceptible levels (≤4 mg/L) in the absence of any growth supplement, but increasing to 8 mg/L when either L-Ser or D-Ser was added to the medium; and (ii) the relative amounts of accumulated UDP-MurNAc-pentapeptide[D-Ser] and tetrapeptide precursors decreasing substantially compared with BM4175/pCA10 and BM4174. The effect on the appearance of tetrapeptide appeared to be host dependent, since a substantial amount was present when the same plasmid construct pJP1 (vanC-1-XYc-TΔ2-322) was electroporated into Enterococcus faecalis JH2-2. The uptake of L-[14C]Ser at 240 s was decreased by ∼40% in BM4175 compared with BM4174. Plasmid pCA10(C-1-XYc-T) restored uptake of L-[14C]Ser at 180 and 240 s in BM4175. The results suggest that the transmembrane domain of VanT is likely to be involved in the transport of L-Ser, and that in its absence the resistance phenotype is compromised.eng
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.identifier.doihttps://doi.org/10.1093/jac/dkg128
dc.identifier.instnameinstname:Universidad El Bosquespa
dc.identifier.issn1460-2091
dc.identifier.reponamereponame:Repositorio Institucional Universidad El Bosquespa
dc.identifier.repourlrepourl:https://repositorio.unbosque.edu.co
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12495/5326
dc.language.isoeng
dc.publisherOxford University Pressspa
dc.publisher.journalJournal of Antimicrobial Chemotherapyspa
dc.relation.ispartofseriesJournal of Antimicrobial Chemotherapy, 1460-2091, Vol. 51, Nro. 3, 2003. p. 557-564spa
dc.relation.urihttps://academic.oup.com/jac/article/51/3/557/897230
dc.rights.accessrightshttps://purl.org/coar/access_right/c_abf2
dc.rights.accessrightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.accessrightsAcceso abierto
dc.rights.creativecommons2003
dc.rights.localAcceso abiertospa
dc.subjectEnterococcusspa
dc.subjectRacemasespa
dc.subjectResistenciaspa
dc.subjectSerinaspa
dc.subjectVancomicinaspa
dc.subject.keywordsEnterococcusspa
dc.subject.keywordsRacemasespa
dc.subject.keywordsResistancespa
dc.subject.keywordsSerinespa
dc.subject.keywordsVancomycinspa
dc.titleRole of the transmembrane domain of the VanT serine racemase in resistance to vancomycin in Enterococcus gallinarum BM4174spa
dc.title.translatedRole of the transmembrane domain of the VanT serine racemase in resistance to vancomycin in Enterococcus gallinarum BM4174spa
dc.type.coarhttps://purl.org/coar/resource_type/c_6501
dc.type.driverinfo:eu-repo/semantics/article
dc.type.hasversioninfo:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.localArtículo de revista

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