Sensibilidad y especificidad del ensayo de reducción de resazurina en pruebas de viabilidad de mucosa oral porcina expuesta a candesartán
Fecha
2019
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Resumen
Antecedentes: La mucosa bucal humana sería el modelo ideal para predecir la cinética de absorción para un fármaco, sin embargo, la escasa disponibilidad de este tejido y las implicaciones éticas que conlleva su empleo han puesto en evidencia la necesidad de buscar modelos ex-vivo que semejan su estructura, actividad metabólica y propiedades de barrera. La mucosa bucal porcina se ha propuesto como modelo alternativo, sin embargo, la viabilidad del tejido afecta significativamente los perfiles de difusión de un fármaco. La viabilidad tisular es comúnmente evaluada a través del ensayo de reducción del MTT y por análisis histológicos, sin embargo, se ha demostrado que estas dos pruebas muestran inconsistencias. Aunque el ensayo de reducción de resazurina es ampliamente usado para evaluar viabilidad celular, su aplicación en pruebas de viabilidad tisular es mucho más limitada. Objetivo: Evaluar la sensibilidad y especificidad del ensayo de reducción de resazurina en pruebas de viabilidad de mucosa oral porcina expuesta a candesartán. Metodología: Se evaluó la viabilidad tisular en mucosa oral porcina a través del ensayo de resazurina a diferentes concentraciones (50, 25, 10 y 5%) y tiempos de experimentación (4 y 16 h), se cuantifican los resultados por medio de URF y densidades ópticas comparándose con la histología (patrón de oro). Los resultados fueron comparados con la prueba de Kruskal Wallis con post hoc prueba de U Mann-Whitney con un nivel de significancia estadística de (p=<0.05), realizando curva ROC se determinó la sensibilidad y especificidad del método. Resultados y Conclusiones: Los puntos de corte obtenidos para el ensayo de reducción de resazurina fueron >5000, >10000 y >20000 URF. El punto de corte más bajo que puede usarse es de 10.000 URF a 16 horas. Valores menores a 10.000 reducen la sensibilidad del método. Dicho ensayo mostró un nivel de correlación con la histología con valores en el análisis ROC de las áreas bajo la curva en comparación con la histología y las URF. El ensayo de resazurina es un método sensible para la evaluación de la viabilidad tisular en mucosa oral porcina.
Descripción
Abstract
Background: Human oral mucous would be the ideal model to predict absorption kinetics of a drug; however, the scarce availability of this tissue and the ethical implications have evidenced the need of ex-vivo models which are similar in structure, metabolic activity and barrier properties. Porcine oral mucous has been proposed as an alternative but its viability significantly affects the diffusion profiles. Tissue feasibility is commonly evaluated with the MTT reduction trial and histological analysis but they have inconsistencies. The resazurin trial is amply used for cellular possibility and its application in tissue viability is more limited. Objective: To evaluate the sensitivity and specificity of the trial by reduction of resazurin in viability tests of porcine oral mucous exposed to candesartan. Methodology: Tissue viability on porcine oral mucous was evaluated by means of risazurin at different concentrations (50%, 25%, 10% and 5%), experiment times (4h and 16h), results were quantified with URF and optical densities compared with the histology (gold standard). Results were compared with the Kruskal Wallis test and U Mann-Whitney post hoc and the significance level was (p=<0.05). A ROC curve determined sensitivity and the method’s specificity. Results and conclusions: Milestones obtained for resazurin were >5000, >10 000 and >20 000 URF, with the minimal usable value of 10 000 URF at 16 hours because values lower than this reduce feasibility. The trial showed correlation with histology with values in the ROC analysis under the curve in comparison with the histology and the URF. The resazurin test is a sensible method for the evaluation of tissue viability in porcine oral mucous.
Palabras clave
Mucosa oral porcina, Viabilidad, Resazurina
Keywords
Porcine oral mucous, Viability, Resazurin