Efecto de la Porphyromonas gingivalis sobre células pre-osteoblásticas MC3T3-E1
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2024-11
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Resumen
Antecedentes: La periodontitis es una enfermedad inflamatoria crónica, multifactorial, que afecta los tejidos de soporte dental, además es el resultado de la interacción de factores ambientales, bacterianos y del hospedador. Porphyromonas gingivalis es una de las bacterias más frecuentemente asociada con la periodontitis, entender los cambios que suceden cuando entra en contacto con los osteoblastos puede darnos bases para comprender los mecanismos de la progresión de esta enfermedad. La literatura reporta algunos estudios mostrando el efecto de P. gingivalis sobre los tejidos blandos, pero no se encuentran datos concluyentes sobre su efecto en las células óseas. Objetivo: Evaluar el efecto de dos cepas de P. gingivalis en la diferenciación de las células pre-osteoblásticas MC3T3-E1 subclón 14. Materiales y Métodos: Cepas de P. gingivalis ATCC 33277 y W83 fueron sembradas en agar Brucella suplementado durante 4 días en condiciones anaeróbicas a 37°C, pasado el tiempo se ajustaron inóculos en medio de cultivo celular sin antibiótico a 1 x 108, a partir de estos se ajustó cada MOI. Se cultivaron las células MC3T3-E1 subclón 14 (ATCC) y se colocaron en contacto durante 12 horas con las cepas de P. gingivalis previamente descritas (Control +, MOI 50, MOI 100, MOI 150 y Control -), cumplido este periodo de tiempo se evaluó la viabilidad celular con el ensayo de resarzurina. Posteriormente se evaluó la formación de nódulos mineralizados a los 14 y 17 días mediante el ensayo de rojo de alizarina para las concentraciones (MOI 50 y MOI 100). Los datos obtenidos se analizaron mediante ANOVA y post test de Tukey con un nivel de confianza del 95%. Resultados: La viabilidad celular de las células MC3T3-E1 disminuyó significativamente (p<0,0001) ante la exposición a las cepas P. gingivalis W83 y P. gingivalis 33277 MOI 50 y MOI 100. El ensayo de rojo de alizarina para P. gingivalis 33277 a los 14 y 17 días de exposición no mostró diferencias significativas entre los grupos (p=0,8672 y p=0,6950, respectivamente). Para la cepa P. gingivalis W83 hubo una disminución estadísticamente significativa a los 14 y 17 días de evaluación (p=0,0423 y p=0,0321 respectivamente). Conclusiones: Las células MC3T3-E1 expuestas a cepas de P. gingivalis W83 y P. gingivalis 33277 tuvieron una disminución de la viabilidad celular, pero solo las expuestas a la cepa P. gingivalis W83 presentaron disminución en la formación de matriz mineralizada.
Descripción
Abstract
Background: Periodontitis is an inflammatory, multifactorial disease that affects the dental support tissues, it is the result of the environmental, bacterial and host factors interaction. Porphyromonas gingivalis is one of the bacteria most frequently associated with periodontitis, understanding the changes that occur when it comes into contact with osteoblasts can give us a basis for understanding the progression mechanisms of this disease. Literature reports some studies about the effect of P. gingivalis on soft tissues, but there is no conclusive data on its effect on bone cells. The objective of this work was to evaluate the effect of two strains of Porphyromonas gingivalis on the differentiation of MC3T3-E1 subclone 14 pre-osteoblastic cells. Aim: To evaluate the effect of two strains of P. gingivalis on the differentiation of MC3T3-E1 subclone 14 pre-osteoblastic cells. Methods: P. gingivalis strains ATCC 33277 and W83 were sown on Brucella agar supplemented for 4 days under anaerobic conditions at 37°C. After that time, the inoculum was adjusted in cell culture medium without antibiotics to 1 x 108, from each MOI. MC3T3-E1 subclone 14 (ATCC) cells were cultured and placed in contact for 12 hours with the previously described P. gingivalis strains (Control +, MOI 50, MOI 100, MOI 150, and Control -), after this period, cell viability was evaluated with the resazurin assay. Subsequently, the formation of mineralized nodules was evaluated at 14 and 17 days using the alizarin red test for concentrations (MOI 50 and MOI 100). The data obtained were analyzed using ANOVA and Tukey's post-test with a confidence level of 95%. Results: The cell viability of MC3T3-E1 cells decreased significantly (p<0.0001) upon exposure to strains P. gingivalis W83 and P. gingivalis 33277 MOI 50 and MOI 100. The alizarin red assay for P. gingivalis 33277 at 14 and 17 days of exposure did not show significant differences between the groups (p=0.8672 and p=0.6950, respectively). For the P. gingivalis W83 strain, there was a statistically significant decrease at 14 and 17 days of evaluation (p=0.0423 and p=0.0321 respectively). Conclusions: MC3T3-E1 cells exposed to strains P. gingivalis W83 and P. gingivalis 33277 had a decrease in cell viability, and only those exposed to strain P. gingivalis W83 showed a decrease in the formation of mineralized matrix.
Palabras clave
Osteoblastos, Porphyromonas gingivalis, Viabilidad celular, Mineralización celular
Keywords
Osteoblasts, Porphyromonas gingivalis, Cell viability, Cell mineralization