Validación de un método de separación y cuantificación de flavonoides totales por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) con detector UV/Vis en la planta Phytolacca octandra L
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2023
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Resumen
El presente trabajo tiene como objetivo llevar a cabo la validación de un método de separación y cuantificación de flavonoides totales por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) con detector UV/Vis en la planta Phytolacca octandra L. Para lo cual se llevó a cabo la separación de los flavonoides por técnicas de extracción sólido-líquido (maceración y soxhlet) mediante el uso de solventes polares como etanol y agua, ensayos de los cuales se seleccionó el método de maceración con etanol:agua en proporciones 50:50 gracias al rendimiento observado según la metodología de cuantificación de Folin-Ciocalteu. Posterior a esto se realizó la estandarización de las condiciones que garantizaran una separación óptima de los flavonoides presentes en el extracto, siendo este el sistema cromatográfico de fase reversa compuesto por una fase móvil de Acetonitrilo:Agua (65:35) y una fase estacionaria de tipo C-18 columna Gemini® 50 μm C18 110Å de 150x4,6 mm, a una temperatura de 30°C, flujo isocrático de 0,5 mL/ min, volumen de inyección de 10 μL, y longitud de onda de 230 nm. Bajo estas condiciones se realizó la determinación de los parámetros de linealidad, precisión, reproducibilidad, exactitud, robustez, límite de detección y límite de cuantificación. De ahí y para garantizar la eficiencia en la separación se evaluaron los parámetros cromatográficos de selectividad, factor de capacidad, resolución y número y altura de platos teóricos. Bajo el procedimiento extracción se pudo determinar que la cantidad de flavonoides presentes en el extracto fue de 881 ppm y a partir de la validación del método se concluye que este método un sistema lineal, preciso, reproducible, exacto, con límites de detección y cuantificación de 22,46 ppm y 68,06 ppm respectivamente.
Descripción
Abstract
The objective of this study was to carry out the validation of a separation and quantification method for total flavonoids by high-performance liquid chromatography (HPLC) with UV/Vis detector in the plant Phytolacca Octandra L. For this purpose, the separation of flavonoids was carried out by solid-liquid extraction techniques (maceration and Soxhlet) using polar solvents such as ethanol and water. The method of maceration with ethanol:water in proportions of 50:50 was selected based on the observed yield according to the Folin-Ciocalteu quantification methodology. After this, the conditions were standardized to ensure optimal separation of flavonoids present in the extract. The chromatographic system consisted of a reverse phase composed of a mobile phase of Acetonitrile:Water (65:35) and a C-18 stationary phase column Gemini® 50 μm C18 110Å of 150x4.6 mm, at a temperature of 30°C, an isocratic flow rate of 0.5 mL/min, injection volume of 10 μL, and wavelength of 230 nm. Under these conditions, the parameters of linearity, precision, reproducibility, accuracy, robustness, limit of detection, and limit of quantification were determined. Chromatographic parameters of selectivity, capacity factor, resolution, and theoretical plate number and height were evaluated to ensure efficiency in separation. From the extraction procedure, it was determined that the amount of flavonoids present in the extract was 881 ppm, and based on the method validation, it was concluded that this method is a linear, precise, reproducible, and accurate system, with detection and quantification limits of 22.46 ppm and 68.06 ppm, respectively.
Palabras clave
Flavonoides, Quercetina, Validación, Cromatografía líquida de alta eficiencia, Folin-Ciocalteu, Phytolacca octandra L.
Keywords
Flavonoids, Quercetin, Validation, High performance liquid chromatography, Folin-Ciocalteu, Phytolacca octandra L.