Validación de un método de separación y cuantificación para el ácido gálico en los frutos de Cotoneaster pannosus proveniente de Bogotá-Colombia por medio de cromatografía líquida de alta eficiencia
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2022
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Resumen
Cotoneaster pannosus conocido también como Holly liso es un arbusto proveniente de China que abunda en las regiones de América, Australia y algunas zonas de Europa. Debido a su alta tasa de crecimiento y maduración se cataloga como una planta potencialmente invasora en diferentes regiones. Los frutos del Holly liso poseen gran variedad de compuestos bioactivos, entre ellos se destaca el ácido gálico, al cual se le atribuye una actividad antioxidante que le permite actuar como agente preventivo por sus propiedades hepatoprotectoras, neuroprotectoras, antifúngicas, entre otras. Se propone un extracto proveniente de los frutos de Holly liso como fuente de ácido gálico para futuros usos medicinales. De modo que, en el presente trabajo se plantea la validación de un método de separación y cuantificación de ácido gálico en los frutos de Cotoneaster Pannosus por medio de cromatografía líquida de alta eficiencia, con el objetivo de establecer las mejores condiciones de separación. En el presente trabajo se plantearon diferentes metodologías de extracción con solventes de bajo impacto ambiental (etanol y agua), por medio de calentamiento, agitación y baño ultrasónico. Donde se resalta la extracción por ultrasonido (etanol: agua 40:60), debido a los resultados obtenidos por HPLC-UV-VIS. Lo anterior se logró gracias a la estandarización de las mejores condiciones cromatográficas, las cuales fueron: columna Phenomenex Gemini 5 μm C18,110 Å, (150 mm x 4,6 mm), temperatura de 30°C, flujo de 0,550 mL/ min en gradiente tipo escalonado o step, volumen de inyección de 20 μL, longitud de onda de 272 nm y una fase móvil compuesta por agua acidificada con ácido fórmico al 0,5% y acetonitrilo HPLC. A partir de la estandarización de las condiciones, se realizó la validación del método de separación determinando robustez, linealidad, precisión, reproducibilidad, exactitud, LDD y LDC. Finalmente se obtuvo un método preciso, lineal, exacto, reproducible, con un límite de detección de 0,475 ppm y un límite de cuantificación de 1,44 ppm.
Descripción
Abstract
Cotoneaster pannosus also known as Holly liso is a shrub from China that abounds in the regions of America, Australia and some areas of Europe. Due to its high growth and maturation rate, it is classified as a potentially invasive plant in different regions. The fruits of Holly liso have a great variety of bioactive compounds, among them gallic acid, which is attributed an antioxidant activity that allows it to act as a preventive agent for its hepatoprotective, neuroprotective, antifungal, and other properties. An extract from the fruits of Holly liso is proposed as a source of gallic acid for future medicinal uses. Thus, the present work proposes the validation of a method for separation and quantification of gallic acid in Cotoneaster pannosus fruits by means of high performance liquid chromatography, with the objective of establishing the best separation conditions. In the present work, different extraction methodologies were proposed with low environmental impact solvents (ethanol and water), by means of heating, agitation and ultrasonic bath. The extraction by ultrasonic bath (ethanol: water 40:60) stands out, due to the results obtained by HPLC-UV-VIS. This was achieved through to the standardization of the best chromatographic conditions, which were: Phenomenex Gemini 5 μm C18,110 Å column, (150 mm x 4.6 mm), temperature of 30°C, flow of 0.550 mL/min in step gradient , injection volume of 20 μL, wavelength of 272 nm and a mobile phase composed of water acidified with 0.5% formic acid and HPLC acetonitrile. From the standardization of the conditions, validation of the separation method was performed by determining robustness, linearity, precision, reproducibility, accuracy, LOQ and LOD. Finally, a precise, linear, accurate, reproducible method was obtained, with a detection limit of 0.475 ppm and a quantification limit of 1.44 ppm.
Palabras clave
Cotoneaster pannosus, Validación, Cromatografía líquida, Acido gálico, Holly liso, HPLC
Keywords
Cotoneaster pannosus, Validation, Liquid chromatography, Gallic acid, Holly liso, HPLC