Estandarización de un modelo de biofilm multiespecies endodóntico in vitro fase I
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2021-06
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Resumen
Introducción: La infección endodóntica primaria ocurre por colonización de microorganismos del género Streptococcus spp, Fusobacterium spp, Prevotella spp, Campylobacter spp, Capnocytophaga spp y Actinomyces spp. El propósito del tratamiento endodóntico es eliminar la pulpa, lograr una desinfección completa del conducto radicular mediante irrigantes y medicamentos; sin embargo, esto no siempre es exitoso. Por ello, es necesario implementar modelos de biopelículas multiespecies endodónticas que permitan a futuro evaluar la eficacia de sustancias antimicrobianas durante el tratamiento de infecciones endodónticas. Objetivo: Desarrollar y estandarizar un modelo de biofilm multiespecies endodóntico in vitro. Materiales y métodos: Se estandarizó un modelo de biofilm multiespecies endodóntico in vitro sobre láminas de vidrio. Se preparó una mezcla de bacterias con F. nucleatum ATCC 25586, A. isrraelii ATCC 12012, S. oralis ATCC 35037, P. endodontalis ATCC 35406, y E. faecalis ATCC 29212 ajustados espectrofotométricamente a 1 x 108 bacterias/mL. 400μL de la mezcla de bacterias, se inoculó por pozo sobre láminas de vidrio. Se formaron biopelículas de 3, 7 y 14 días a 37°C en condiciones de anaerobiosis. Se verificó viabilidad después de cada tiempo de formación mediante plaqueos en agar Brucella, sangre y BHI. La biomasa del biofilm fue calculada mediante el método de cristal violeta y el porcentaje de viabilidad bacteriana se determinó usando el kit (LIVE/DEAD® BacLight Bacterial Viability, Molecular Probes®). Se realizó análisis por MALDI-TOF para verificar identidad de colonias con fenotipo variable en el biofilm. Todos los experimentos fueron realizados por triplicado en experimentos independientes. Resultados: Se evidenció crecimiento de S. oralis y E. faecalis en los 3 tiempos de formación; A. isrraelii sólo creció a los 7 días, P. endodontalis solo creció a los 14 días de formación de biofilm y F. nucleatum no creció en ningún tiempo de incubación. La biomasa del biofilm disminuye conforme avanza el tiempo y el porcentaje de viabilidad es similar en los 3 tiempos. Conclusión: Se formaron biopelículas multiespecies endodónticas con un porcentaje de viabilidad alto y encontrando una reducción de la biomasa del biofilm conforme aumentan los días de formación.
Descripción
Abstract
Introduction: Primary endodontic infection occurs due to colonisation of Streptococcus spp, Fusobacterium spp, Prevotella spp, Campylobacter spp, Capnocytophaga spp and Actinomyces spp. The purpose of endodontic treatment is to eliminate the pulp and achieve complete disinfection of the root canal by means of irrigates and medication. However, this is not always successful. It is necessary to implement endodontic multi-species biofilms, which allow the evaluation of the efficiency of anti-microbial substances during infectious treatment. Objective: To develop and standardize an in vitro endodontic multi-species biofilm model. Materials and methods: A model was standardized as mentioned above on a glass plate. A mixture with F. nucleatum ATCC 25586, A. isrraelii ATCC 12012, S. oralis ATCC 35037, P. endodontalis ATCC 35406 and E. faecalis ATCC 29212 was prepared spectophotometrically adjusted to 1 x 108 bacteria/mL. 400μL of said mixture was inoculated on a glass plates. Biofilms formed after 3, 7 and 14 days at 37 ˚C in anaerobic conditions. Viability was verified after each development period with samples in Brucella agar, blood and BHI. The biofilm’s biomass was calculated with the crystal violet method and percentage was determined using the (LIVE/DEAD® BacLight Bacterial Viability, Molecular Probes®) kit. An analysis with MALDI-TOF was performed in order to verify the phenotype colonies in the biofilm and all tests were carried out in independent triplicate experiments. Results: Growth of S. oralis and E. faecalis was evidenced during the three growth periods; A. isrraelii only grew after seven days and P. endodontalis after 14. F. nucleatum did not grow during any incubation period. The biofilm’s mass diminishes as time progresses and the viability was similar for the three periods. Conclusions: endodontic multi-species biofilms with high viability were formed; mass was reduced as development time progressed.
Palabras clave
Infección endodóntica primaria, Biofilm, Bacterias, Cristal violeta, Viabilidad
Keywords
Primary endodontic infection, Biofilm, Bacteria, Crystal violet, Viability