Examinando por Autor "MacDiarmid, Jennifer"

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    3D tissue culture- a more efficient and predictive model for the assessment of EDVTMnanocell delivery to tumours
    (Wiley, 2014) Mugridge, Nancy; Vanegas, Natasha; Pattison, Stacey; Smolarczyk, Katarzyna; Brahmbhatt, Himanshu; MacDiarmid, Jennifer
    Como primer puerto de escala para evaluar el valor terapéutico de un compuesto, el cultivo de tejidos es una herramienta crítica. Sin embargo, la falta de semejanza del cultivo tisular bidimensional (2D) tradicional con los modelos tumorales siempre ha demostrado ser un factor limitante, y más aún para las terapias dirigidas basadas en partículas que dependen más de la estructura del tejido natural para la unión y la administración. Con la aparición de varios modelos 3D in vitro, se pueden realizar estudios en esferoides tumorales que simulan más de cerca la unión e interacción de célula a célula natural. Aquí demostramos que el cultivo de tejidos en 3D es un modelo más efectivo para la entrega de una nanopartícula específica que lleva una carga útil de siRNA o miRNA. EDVTMnanocell patentado por EnGeneIC es un vehículo versátil capaz de empaquetar concentraciones terapéuticamente significativas de fármacos quimioterapéuticos y moléculas dirigidas molecularmente como siRNA y miRNA. Se puede recubrir con un diacuerpo biespecífico para una administración dirigida y una toxicidad muy reducida. En modelos de ratones con xenoinjertos y otros estudios en animales en los que las nanocélulas EDVTM administraron siARN o miARN, hemos demostrado una eficacia significativa del tratamiento, incluida la regresión tumoral y la eliminación de genes. Sin embargo, el cultivo de tejidos 2D no ha demostrado ser consistente en mostrar la muerte de células tumorales in vitro ni como predictor de eficacia en modelos in vivo posteriores. Hemos cultivado varias líneas de células tumorales diferentes como esferoides tridimensionales, incluidas algunas derivadas directamente de pacientes. Después de evaluar varios sistemas de modelos de esferoides para la administración y la absorción de nuestra nanocélula, descubrimos que la gota colgante de Biomatrix y el método de recubrimiento de gel fueron más útiles para mostrar una viabilidad celular reducida y una eliminación de genes en células tumorales tratadas con nanocélulas EDVTM que portan diferentes siARN o miARN y se dirigieron con anti-EGFR. Usando líneas de células estándar (ATCC), encontramos una penetración mejorada de nanocélulas que llevan siRNA contra la proteína PLK1 de la quinasa 1 tipo polo, en células de cáncer de colon HCT116 cultivadas en placas colgantes o matriz de gel como se muestra bajo microscopía confocal. La administración de siPLK1 dio como resultado una viabilidad celular reducida, detención mitótica y eliminación del ARNm de PLK1 en comparación con las nanocélulas que transportan ARNip sin sentido. Del mismo modo, demostramos que la entrega de partículas de un miR-34 mimético a los esferoides A549 del cáncer de pulmón dio como resultado una viabilidad celular reducida y la eliminación de uno de sus genes antiapoptóticos aguas abajo, Bcl 2. Además, hemos cultivado esferoides a partir de carcinomas de células suprarrenales derivados de pacientes, ACC (cortesía del profesor Stan Sidhu, Royal North Shore Hospital) en los que pudimos probar varias moléculas de siRNA y miRNA para determinar los efectos de destrucción celular. Hemos descubierto que los modelos de esferoides son una forma eficiente de predecir la eficacia de las nanocélulas EDVTM que transportan siRNA y miRNA, ya que imitan de cerca el crecimiento tumoral en modelos de xenoinjertos.
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    Restoring expression of MIR-7 by targeted bacterial minicells inhibits the MAPK/ERK pathway and offers a novel therapy for adrenocortical cancer
    (Wiley, 2014) Glover, Anthony; Zhao, Jing Ting; Weiss, Jocelyn; Vanegas, Natasha; Reid, Glen; Robinson, Bruce; Soon, Patsy; Brahmbhatt, Himanshu; MacDiarmid, Jennifer; Sidhu, Stan
    Antecedentes: el cáncer adrenocortical metastásico (ACC) tiene un mal pronóstico con opciones de tratamiento limitadas. Los estudios piloto de nuestro laboratorio han identificado una serie de microARN, incluido el microARN-7 (miR-7), que están significativamente subexpresados ​​en la ACC en comparación con la corteza suprarrenal normal, lo que implica la participación de los microARN en la patogenia de la ACC y su potencial como una diana terapéutica. Objetivos: establecer el papel y los mecanismos de miR-7 como supresor de tumores en ACC y evaluar el papel de la terapia de reemplazo de miR-7, administrada a través de minicélulas bacterianas como un tratamiento novedoso. Métodos: el reemplazo de miR-7 se realizó en líneas celulares ACC (H295R, SW-13) en sistemas de cultivo celular 2D y 3D. Se estableció un modelo de xenoinjerto de ratón utilizando la línea celular H295R y cultivos celulares primarios y se administró terapia de reemplazo de microARN sistémico en minicélulas/vehículos de administración (EDV) EnGeneIC dirigidos a EGFR derivados de bacterias. Resultados: El papel de miR-7 como supresor de tumores in vitro se confirmó después de que el reemplazo condujo a una reducción de la proliferación celular y la migración celular (P < 0.05). El análisis del ciclo celular mostró que esto se debe a la detención de G1 (P < 0,05) sin diferencias en las tasas de apoptosis. Se encontró que los objetivos predicados de miR-7, EGFR y C-Raf, después del reemplazo, tenían una expresión reducida de ARNm y proteínas (P < 0.05). Los ensayos de informes de luciferasa confirmaron las secuencias de unión de semillas de EGFR y C-Raf como objetivos de miR-7. La terapia de reemplazo de miR-7 en un modelo de xenoinjerto de ratón causó un crecimiento tumoral significativamente reducido en comparación con los ratones tratados con control sin evidencia de toxicidad y una expresión reducida de ARNm de C-Raf y mTOR (P < 0.05). Conclusiones: miR-7 actúa como un supresor de tumores en ACC al inhibir la vía MAPK/ERK y la terapia de reemplazo cuando se administra a través de minicélulas dirigidas ofrece un gran avance potencial en el tratamiento de esta malignidad mortal.