Examinando por Autor "Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]"
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Ítem Anticuerpos policlonales contra la proteína recombinante NS3 del virus del dengue(Instituto Nacional de Salud, 2017) Castellanos, Jaime; Morales, Liliana; Velandia-Romero, Myriam Lucía; Calderón-Peláez, María Angélica; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Castellanos, Jaime [0000-0003-1596-8383]; Velandia-Romero, Myriam Lucía [0000-0002-3340-7304]; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Introducción. El dengue es una enfermedad causada por uno de los cuatro serotipos del virus del dengue (DENV) y es endémica en, aproximadamente, 130 países. Su incidencia ha aumentado notablemente en las últimas décadas, así como la frecuencia y la magnitud de los brotes. A pesar de los esfuerzos, no existen tratamientos profilácticos ni terapéuticos contra la enfermedad y, en ese contexto, el estudio de los procesos que gobiernan el ciclo de infección del DENV es esencial para desarrollar vacunas o terapias antivirales. Una de las moléculas del DENV más prometedoras es la proteína no estructural 3 (NS3), la cual es indispensable para la replicación viral y es uno de los principales blancos inmunológicos durante la infección. Objetivo. Producir anticuerpos policlonales para contribuir a los futuros estudios sobre las interacciones entre la proteína NS3 y otras proteínas celulares. Materiales y métodos. Se expresaron dos proteínas recombinantes del dominio helicasa de NS3 del DENV de serotipo 2, las cuales se emplearon para inmunizar ratas y producir anticuerpos policlonales. Resultados. Los anticuerpos producidos fueron útiles en ensayos de Western blot e inmunofluorescencia y se reportó por primera vez un anticuerpo policlonal anti-NS3 que permitió la inmunoprecipitación de la proteína viral y la detecta con Western blot sin necesidad de inducir sobreexpresión de NS3 o de usar extractos de células marcados metabólicamente con radioisótopos. Conclusión. Las proteínas recombinantes expresadas y los anticuerpos producidos constituyen herramientas valiosas para estudiar procesos infecciosos del DENV que involucren a la proteína NS3 y evaluar pruebas dirigidas a interferir las funciones de esta proteína.Ítem Comparación sistemática de estrategias para lograr la expresión soluble de proteínas recombinantes de plasmodium falciparum en E. coli(Springer) Morales, Liliana; Hernández, Paula; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Se utilizaron construcciones que contenían secuencias codificantes parciales de miosina A, miosina B y proteína asociada a glideosoma (50 kDa) de Plasmodium falciparum para desafiar varias estrategias diseñadas para mejorar la producción y solubilidad de proteínas recombinantes en Escherichia coli. Los ensayos se llevaron a cabo induciendo la expresión en un cultivo en fase logarítmica tardía, optimizando la concentración del inductor, reduciendo la temperatura de crecimiento de los cultivos inducidos y complementando los aditivos en el tampón de lisis. Además, las proteínas recombinantes se expresaron como proteínas de fusión con tres etiquetas diferentes (6His, GST y MBP) en cuatro cepas de E. coli diferentes. Descubrimos que la única condición que producía proteínas solubles consistentemente era el uso de MBP como etiqueta de fusión, que se convirtió en una herramienta valiosa para detectar las proteínas utilizadas en este estudio y no causó ninguna interferencia en los ensayos de interacción proteína-proteína (Far Western Blot). Además, encontramos que la cepa BL21-pG-KJE8 no mejoró la solubilidad de ninguna de las proteínas recombinantes producidas, mientras que la cepa BL21-CodonPlus (DE3) -RIL mejoró la expresión de algunas de ellas independientemente del contenido de codones raros. Las proteínas con codones raros que se encuentran en frecuencias altas (> 10%) se expresaron de manera eficiente en cepas que no complementan los ARNt de estos tripletes. mientras que la cepa BL21-CodonPlus (DE3) -RIL mejoró la expresión de algunos de ellos independientemente del contenido de codones raros. Las proteínas con codones raros que se encuentran en frecuencias altas (> 10%) se expresaron de manera eficiente en cepas que no complementan los ARNt de estos tripletes. mientras que la cepa BL21-CodonPlus (DE3) -RIL mejoró la expresión de algunos de ellos independientemente del contenido de codones raros. Las proteínas con codones raros que se encuentran en frecuencias altas (> 10%) se expresaron de manera eficiente en cepas que no complementan los ARNt de estos tripletes.Ítem Determinación del ensamblaje genético de aislados axénicos colombianos de Giardia intestinalis(Universidad del Norte, 2016) Chaparro-Olaya, Jacqueline; Hernández Atehortua, Paula Constanza; Morales, Liliana; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Objetivo: Genotipificar muestras de Giardia aisladas de pacientes de tres regiones geográficas de Colombia. Materiales y métodos: Se examinaron 22 aislados de G. intestinalis, los primeros descritos cultivados axénicamente de origen colombiano por medio del análisis del polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) del gen glutamato deshidrogenasa (gdh). Resultados y conclusión: El patrón del RFLP mostró que todos los aislados pertenecían al ensamblaje A, específicamente al AI; resultado confirmado por secuenciación. Con este estudio se pretende contribuir al conocimiento de los genotipos circulantes de Giardia intestinalis en Colombia.Ítem Ensamblaje y liberación del virus dengue: Controversia sobre la participación de la proteína alix(Universidad nacional de colombia, 2019) Bueno Angarita, Claudia Liliana; Morales, Liliana; Velandia-Romero, Myriam Lucía; Calderón-Peláez, María Angélica; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Velandia-Romero, Myriam Lucía [0000-0002-3340-7304]; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Algunos virus envueltos usurpan la maquinaria celular ESCRT (complejo de clasificación endosomal requerido para el transporte) para llevar a cabo funciones como la transcripción, la traducción, el ensamblaje y la liberación de partículas virales desde las células huésped. Aunque esta estrategia ha sido estudiada principalmente en retrovirus, son varios los virus envueltos que la usan. El objetivo del trabajo fue explorar la participación de una proteína accesoria de ESCRT, la proteína Alix, en la transcripción, traducción, ensamblaje y liberación del virus dengue (DENV), así como su interacción con la proteína viral NS3. Células A549 infectadas con DENV2 fueron tratadas con pequeños ARN de interferencia (siRNA) para disminuir la expresión (“knock-down”) de la proteína Alix. Simultáneamente, se obtuvo una línea A549 que expresaba una proteína NS3 recombinante y sobre este sistema se hicieron ensayos de inmunoprecipitación y “pull-down” para detectar interacción entre NS3 y Alix. Los resultados mostraron que el “knock-down” de Alix no tuvo efecto notable en la transcripción o la traducción viral, pero sí en el ensamblaje y la liberación de DENV2, mientras que los ensayos de “pull-down” revelaron la interacción entre NS3 y Alix. La participación de Alix en la producción de DENV2 y su interacción con NS3 constituyen un potencial blanco para el diseño de estrategias dirigidas a controlar la propagación de DENV.Ítem In vitro interaction between plasmodium falciparum myosin B (PfMyoB) and myosin a tail interacting protein (MTIP)(Springer, 2018) Hernández, Paula C.; Wasserman, Moisés; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Ítem Intestinal parasitic infections and associated factors in children of three rural schools in Colombia. A cross-sectional study(Public Library of Science, 2019) Hernández Atehortua, Paula Constanza; Morales, Liliana; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Sarmiento-Senior, Diana; Jaramillo, Juan Felipe; Ordoñez-Sierra, Gustavo Adolfo; Cortés Muñoz, Fabián; Sánchez, Lizeth K.; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]; Jaramillo, Juan Felipe [0000-0001-6417-8578]; Sarmiento-Senior, Diana [0000-0002-9959-3226]; Ordoñez-Sierra, Gustavo Adolfo [0000-0003-2178-5946]Ítem Myosin B of plasmodium falciparum (PfMyoB): in silico prediction of its three-dimensional structure and its possible interaction with MTIP(Springer, 2017) Hernández, Paula C.; Morales, Liliana; Castellanos, Isabel C.; Wasserman, Moisés; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Ítem Producción de proteínas recombinantes de Plasmodium falciparum en Escherichia coli(Instituto Nacional de Salud, 2016) Guerra, Angela Patricia; Calvo, Eliana; Wasserman, Moisés; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]; Calvo, Eliana [0000-0002-9135-0748]Introducción. La producción de proteínas recombinantes es fundamental para el estudio funcional de las proteínas de Plasmodium falciparum. Sin embargo, las proteínas recombinantes de P. falciparum están entre las más difíciles de expresar y, cuando lo hacen, usualmente se agregan dentro de cuerpos de inclusión insolubles. Objetivo. Evaluar la producción de cuatro proteínas de P. falciparum usando como sistema de expresión dos cepas de Escherichia coli genéticamente modificadas para favorecer la producción de proteínas heterólogas y establecer una reserva de proteínas recombinantes puras y solubles, y producir anticuerpos policlonales a partir de ellas. Materiales y métodos. Las proteínas recombinantes, las cuales correspondían a secuencias parciales de PfMyoA (Miosina-A) y PfGAP50 (proteína-asociada a glideosoma de 50 kDa) y a las secuencias completas de PfMTIP (proteína de interacción con miosina-A) y PfGAP45 (proteína asociada a glideosoma de 45 kDa), fueron expresadas como proteínas de fusión con la glutatión S-transferasa y luego purificadas y usadas para producir anticuerpos policlonales en ratón. Resultados. La expresión de las proteínas recombinantes fue mucho más eficiente en la cepa BL21-CodonPlus (la cual expresa tRNAs escasos en las bacterias silvestres), que en la cepa BL21-pG-KJE8. Por el contrario, aunque la cepa BL21-pG-KJE sobreexpresa chaperonas, no redujo la formación de cuerpos de inclusión. Conclusión. El uso de cepas de E. coli genéticamente modificadas fue fundamental para alcanzar altos niveles de expresión de las cuatro proteínas recombinantes evaluadas y permitió obtener dos de ellas en forma soluble. La estrategia utilizada permitió expresar cuatro proteínas recombinantes de P. falciparum en cantidad suficiente para inmunizar ratones y producir anticuerpos policlonales y, además, conservar proteína pura y soluble de dos de ellas para ensayos futuros.Ítem Producción y caracterización de un anticuerpo policlonal dirigido contra la fosfoproteína del virus de la rabia(Instituto Nacional de Salud, 2007) Castañeda, Nadia Yadira; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Castellanos, Jaime; Castellanos, Jaime [0000-0003-1596-8383]; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]Introducción. La producción de una proteína viral recombinante facilita la aplicación de diversasmetodologías bioquímicas en investigación básica de los virus con relevancia clínica. Además,la obtención de un anticuerpo policlonal dirigido contra la proteína P permite el estudio de sufunción y está soportado en la inexistencia de un anticuerpo comercial dirigido contra esaproteína. Objetivo. Producir y caracterizar un anticuerpo policlonal dirigido contra la proteína Precombinante del virus de la rabia expresada en Escherichia coli. Materiales y métodos. El gen P que codifica para la proteína P del virus de la rabia, fueamplificado por reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa reversa y clonado en elvector de expresión PinPointTM Xa-1 T (PROMEGA). La proteína recombinante P fue expresadaen E. coli purificada por cromatografía de afinidad y usada para la producción del anticuerpopoliclonal anti-P. El anticuerpo obtenido fue purificado y caracterizado por inmunocitoquímicacon un sistema enzimático, inmunofluorescencia, Cell-ELISA fluorométrica y Western blotting. Resultados. La proteína recombinante se expresó eficientemente como una proteína de fusiónbiotinilada de aproximadamente 50 kd, que corresponde a la forma completa de la proteína Pdel virus de la rabia. El anticuerpo policlonal anti-P detectó con alta especificidad la proteína Pen cultivos de neuronas sensoriales infectados con el virus de la rabia. Conclusión. La proteína P recombinante expresada en E. coli se constituyó en un antígenoespecífico para producir un anticuerpo policlonal que reconoce la proteína P nativa en célulasinfectadas con el virus de la rabia.Ítem The rabies virus phosphoprotein synthesis and subcellular localization are modified by nerve growth factor(Taylor & Francis, 2009) Castañeda, Nadia Y.; Chaparro-Olaya, Jacqueline; Acosta, Orlando; Castellanos, Jaime; Castellanos, Jaime [0000-0003-1596-8383]; Chaparro-Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]