Examinando por Autor "Chaparro Olaya, Jacqueline"
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Ítem Estudio de la Miosina C de Plasmodium falciparum (PfMYO-C)(2011) Aponte Briceño, Samanda Lizbeth; Chaparro Olaya, JacquelineDe las cinco especies de Plasmodium que causan la malaria, P. falciparum es la que produce la mayor mortalidad en el mundo, a pesar de los esfuerzos de los países endémicos por implementar diferentes estrategias para su control y potencial erradicación. El conocimiento de los procesos biológicos de P. falciparum es una herramienta clave para la postulación de blancos terapéuticos o blancos para vacunas. Las miosinas son proteínas motoras que participan en muchos de estos procesos en las células eucariotas y hasta el momento en P. falciparum se han identificado seis secuencias que codifican para miosinas y se han caracterizado cinco durante el ciclo intraeritrocitario. Por su transcripción, localización y función, dos de estas miosinas se han visto potencialmente involucradas en el proceso de invasión (Pfmyo-A y Pfmyo-B) mientras que las otras tres (Pfmyo-D, Pfmyo-E y Pfmyo-F) al parecer se encuentran actuando en procesos diferentes aún desconocidos. Pfmyo-C es la única miosina de P. falciparum que aún no se ha caracterizado; sinembargo de esta proteína se conoce su patrón de transcripción y varias características particulares en su secuencia, en especial la presencia de repeticiones de tipo WD40 que sugieren que esta miosina puede estar involucrada en procesos diferentes al de la invasión. El objetivo de este trabajo fue realizar un acercamiento a la caracterización de Pfmyo-C durante el ciclo intraeritrocitario en cuanto a su transcripción, expresión y localización, así como analizar su secuencia empleando herramientas bioinformáticas con el fin de inferir la posible función de esta proteína en P. falciparum. Los resultados obtenidos mediante RT-PCR muestran que la expresión de mARN de Pfmyo-C se da principalmente en el estadío de trofozoitos maduros y esquizontes tempranos, y este patrón correlaciona directamente con la expresión de Pfmyo-C en el estadío de esquizonte temprano determinada por western-blot empleando sueros policlonales obtenidos a partir de ratones inoculados con una proteína recombinante para Pfmyo-C. No obstante, el tamaño detectado de la proteína no correlaciona con el tamaño esperado (250KDa), lo que nos hace sugerir la presencia de un intrón no predicho en las bases de datos, o la existencia de una modificación o procesamiento de la proteína. Con base en los análisis de dominios de Pfmyo-C, podemos sugerir de manera muy preliminar que esta proteína puede estar involucrada en procesos de transducción de señales durante las últimas etapas de desarrollo del parásito dentro del glóbulo rojo.Ítem Evaluación de estrategias para la producción de proteínas recombinantes solubles de Plasmodium falciparum, en un sistema procariote(2013) Morales de la Pava, Liliana; Chaparro Olaya, Jacqueline; Hernández Atehortúa, Paula ConstanzaLa malaria es la enfermedad parasitaria con el mayor número de casos clínicos y muertes reportadas al año, causados principalmente por Plasmodium falciparum, una de las cinco especies que infecta a humanos. Diversas estrategias de control se han implementado para combatir la enfermedad, desde el desarrollo de campañas de educación para evitar la transmisión, hasta el uso de insecticidas y medicamentos contra el vector y el parásito. En miras de desarrollar nuevas estrategias para bloquear la enfermedad, la invasión del parásito al glóbulo rojo ha despertado gran interés en los últimos años, proceso que es llevado a cabo por un complejo de proteínas denominado Glideosoma, que incluye, entre otras proteínas, un motor actina-miosina. Hasta la fecha se han identificado seis miosinas en P. falciparum y solo una de ellas (PfMyoA) ha sido caracterizada como participante activa en el Glideosoma; sin embargo, resultados previos de nuestro laboratorio acompañan la idea de que otra miosina del parásito posiblemente participa en el proceso de invasión. Para retar dicha hipótesis es necesaria la evaluación de interacciones entre todas las proteínas del Glideosoma y la miosina candidata, para lo cual obtener el repertorio completo de las proteínas es imperativo; de esta manera, la producción de proteínas recombinantes se convierte en la estrategia molecular de elección. Sin embargo, la obtención de proteínas recombinantes solubles de P. falciparum es un desafío, debido a características muy particulares en el genoma del parásito. El objetivo de este trabajo fue evaluar estrategias que permitieran la obtención de proteínas recombinantes solubles, bien sea a partir de la expresión soluble o de la recuperación a partir de cuerpos de inclusión, sin la adición de agentes caotrópicos para la solubilización. Adicionalmente, con el fin de conocer si el genoma de P. falciparum tenía más miosinas (diferentes a las ya descritas) se hizo un análisis bioinformático para la búsqueda de nuevas secuencias. Por otro lado, se realizó una comparación de estructuras terciarias entre PfMyoA y nuestro candidato a homólogo funcional (PfMyoB), para lo cual la identificación de similitudes entre las estructuras, soportaría dicha hipótesis. Los resultados obtenidos en la inducción de la expresión soluble, indicaron que ninguno de los parámetros evaluados en la inducción, como temperatura, concentración de IPTG y densidad óptica (DO), tuvo efecto en la solubilidad de las proteínas recombinantes rPfMyoB y rPfGAP50. Sorprendentemente, el uso de vectores con secuencias fusión y bacterias modificadas para la optimización de la traducción y plegamiento, tampoco ofrecieron ventajas significativas sobre la solubilidad, pues solo un poco de expresión soluble se obtuvo con la combinación del vector pMAL y las bacterias chaperonas; sin embargo, la mayoría de la proteína recombinante se concentró junto con los cuerpos de inclusión; por consiguiente nuestros resultados sugieren que la marcada insolubilidad de las recombinantes producidas, está influenciada por características propias de la secuencia proteica (aún no establecidas) y no a condiciones en la inducción de la expresión. Teniendo en cuenta que las recombinantes siempre se expresaron como proteínas insolubles, se desarrolló una estrategia de electro elusión para la recuperación de recombinantes solubles de P. falciparum desde cuerpos de inclusión. Adicionalmente, con base en la comparación de los resultados en la predicción de solubilidad de programas bioinformáticos y los obtenidos experimentalmente, se concluye que la única manera de conocer el comportamiento soluble de las proteínas recombinantes de P. falciparum producidas en Escherichia coli, es mediante el desarrollo experimental.Ítem Exploring Blastocystis genetic diversity in rural schoolchildren from Colombia using next-generation amplicon sequencing reveals significant associations between contact with animals and infection risk(Springer Nature, 2023) Hernández, Paula C.; Maloney, Jenny G.; Molokin, Aleksey; George, Nadja S.; Morales, Liliana; Chaparro Olaya, Jacqueline; Santin, Monica; Hernández, Paula C. [0000-0002-2136-7755]; Maloney, Jenny G. [0000-0002-6405-883X]; Molokin, Aleksey [0000-0002-4571-7641]; George, Nadja S. [0000-0001-8681-3544]; Morales, Liliana [0000-0002-0906-5383]; Chaparro Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]; Santin, Monica [0000-0002-1386-6255]Blastocystis es un protista intestinal común con una distribución mundial en humanos y muchos otros animales. Sin embargo, el estatus de Blastocystis como patógeno, los factores de riesgo asociados a su transmisión y su potencial zoonótico siguen sin estar bien definidos. Aquí, exploramos la diversidad del subtipo (ST) y los factores de riesgo potenciales para la infección por Blastocystis en 98 niños de Apulo, Colombia. Las muestras fueron cribadas para Blastocystis mediante PCR, y la identificación de ST se realizó mediante secuenciación de amplicones de próxima generación (NGS). Las asociaciones entre la presencia de Blastocystis y ST individuales y las variables sociodemográficas se evaluaron mediante análisis de regresión logística. Setenta y una muestras (72,4%) fueron positivas para Blastocystis, y la NGS reveló la presencia de cinco ST (ST1-ST5). ST1, ST2 y ST3 fueron comunes y se observaron en proporciones casi iguales (~ 40%), mientras que las muestras con ST4 (1,4%) y ST5 (5,6%) fueron comparativamente raras. También fue frecuente la presencia de ST mixtos en la misma muestra (28,2%). Las comparaciones entre niños de un mismo hogar revelaron que los perfiles de ST compartidos eran frecuentes, pero también se observó diversidad dentro de las unidades familiares. Los análisis de regresión logística arrojaron asociaciones significativas entre la presencia de Blastocystis, subtipos individuales o subtipos mixtos para varias variables. Curiosamente, la presencia de animales fue una de las asociaciones significativas más comunes. En conjunto, estos datos representan un importante paso adelante en la comprensión tanto de las rutas potenciales como de los factores de riesgo que pueden influir en la transmisión de Blastocystis, y serán útiles para dar forma a futuros estudios que traten de aclarar las relaciones entre los ST, la patogenicidad y la transmisión zoonótica.Ítem Microbioma intestinal diferencial en pacientes con espondiloartritis asociada a colonización de Blastocystis(Laboratorio de Parasitología Molecular, Vicerrectoría de Investigaciones, Universidad El Bosque, Edificio O. Segundo Piso, Avenida Carrera 9 #131A-02, Bogotá, Colombia, 2023) Nieto Clavijo, Carlos; Morales, Liliana; Márquez Ortiz, Ricaurte Alejandro; Romero Sánchez, Consuelo; Ramos Casallas, Alejandro; Escobar Pérez, Javier; Bautista Molano, Wilson; Bello Gualtero, Juan Manuel; Chaparro Olaya, Jacqueline; Nieto Clavijo, Carlos [0000-0002-8806-3270]; Márquez Ortiz, Ricaurte Alejandro [0000-0002-7188-6158]; Romero Sánchez, Consuelo [0000-0002-6973-7639]; Ramos Casallas, Alejandro [0000-0002-8742-7845]; Escobar Pérez, Javier [0000-0002-0432-6978]; Bautista Molano, Wilson [0000-0003-0684-9542]; Bello Gualtero, Juan Manuel [0000-0003-1982-124X]; Chaparro Olaya, Jacqueline [0000-0001-9815-3459]El papel de Blastocystis en la salud intestinal es una controversia abierta, y poco se sabe sobre el efecto potencial de este microorganismo en enfermedades autoinflamatorias como la espondiloartritis (EspA). Aquí, analizamos el microbioma intestinal de 36 pacientes con SpA y 13 individuos de control y demostramos que la riqueza, diversidad y composición taxonómica entre estos dos grupos son diferentes. También demostramos que la colonización por Blastocystis en individuos de control aumenta la riqueza y diversidad del microbioma intestinal, mientras que en pacientes con SpA no parece tener ningún impacto. Esto puede reflejar un papel potencial de Blastocystis en esculpir la arquitectura del microbioma intestinal en individuos de control, mientras que en sujetos con SpA, La modulación del microbioma puede estar gobernada por factores dependientes de la enfermedad que Blastocystis no puede superar. En cuanto a la caracterización taxonómica, los pacientes con EspA colonizados por Blastocystis mostraron aumentos significativos en el filo Pseudomonadota, clase Gammaproteobacteria, familia Succinivibrionaceae y género Succinivibrio. Simultáneamente, hubo aumentos significativos en la clase Bacilli, orden Lactobacillales, familias Lactobacillaceae y Clostridiaceae, y géneros Lactobacillus y Clostridium en pacientes con EspA no colonizados. Por otro lado, el análisis PICRUSt en pacientes con SpA positivas para Blastocystis mostró elevaciones en las vías que pueden mejorar las capacidades antioxidantes y aliviar la inflamación intestinal. mientras que los pacientes con SpA negativa para Blastocystis mostraron cambios significativos en las vías que promueven la división/proliferación celular y pueden conducir a cambios mayores en el microbioma intestinal. Nuestros análisis nos llevan a creer que estos cambios en el microbioma intestinal de los pacientes con SpA pueden desencadenar mecanismos de protección como respuesta inicial a la inflamación en un intento de restablecer el equilibrio en el entorno intestinal. © 2023, Springer Nature Limitado.Ítem Prevalencia y factores médicos - nutricionales asociados con parasitosis intestinal en pacientes entre 5- 15 años de edad en 3 escuelas rurales de Apulo Cundinamarca durante el periodo del 2017(2019) Sánchez Zorro, Lizeth Karina; Hernández Atehortua, Paula Constanza; Chaparro Olaya, Jacqueline; De La Hoz Valle, José Antonio; Gomez Zuñiga, Carlos EduardoIntroducción: La parasitosis intestinal es un problema de salud pública. Las parasitosis por protozoos y geohelmintos son de gran relevancia para el estudio de comunidades aisladas en Colombia. Materiales y métodos: Estudio observacional, analítico, de corte transversal, en niños de tres escuelas de Apulo, Colombia. Se realizó diagnóstico de parasitismo con 1 muestra de material fecal mediante las técnica directa, kato katz y concentrado. Se realizó un modelo de regresión logística para determinar factores asociados a la presencia de parasitismo. Resultados: La prevalencia de parásitos intestinales fue por patógenos en un 73.77% y comensales 26.26%. Identificándose 5 especies de parásitos patógenos (Giardia Intestinalis, Trichuris Trichuria, Complejo de Entamoeba Histolytica/Dispar, Enterobius vermicularis y Áscaris lumbricoides); 40.21% de los sujetos evaluados presentaron riesgo de delgadez mientras 38.14% presentaron riesgo de talla baja. No hay diferencias estadísticamente significativas entre la clasificación nutricional de acuerdo al IMC y talla y la presencia de parasitosis intestinal. El modelo ajustado mostró que la presencia de dolor abdominal como signo clínico (OR: 2.55 [IC95% 1.08-5.96] se asoció a parasitismo y las deposiciones de consistencia dura (OR: 0.29 [IC95% 0.09-0.94] reduce de manera estadísticamente significativa la posibilidad de presentar parasitosis intestinal. Conclusiones: Este estudio muestra un alta prevalencia de parásitos intestinales principalmente por protozoos. Identificar el dolor abdominal como hallazgo al examen físico es un factor asociado a la parasitosis intestinal.