Diseño de la etapa de biorrecepción-transducción de un genosensor para la identificación de Helicobacter pylori en muestras de fluido gástrico
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2025-05
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Resumen
Helicobacter pylori es una bacteria que coloniza la mucosa gástrica y está asociada a enfermedades como la gastritis y el cáncer gástrico, representando un desafío para su detección debido a la limitada sensibilidad y especificidad de los métodos actuales. En este contexto, los biosensores surgen como una alternativa prometedora, aunque su sensibilidad y estabilidad dependen en gran medida de la elección del transductor, el biorreceptor y la estrategia de inmovilización.
Este estudio desarrolla la etapa de biorrecepción-transducción de un genosensor electroquímico para la detección de Helicobacter pylori en muestras de fluido gástrico. Inicialmente, se estableció un diseño conceptual considerando las propiedades fisicoquímicas del fluido, seleccionando un electrodo serigrafiado de oro con una superficie modificada para mejorar la sensibilidad en la detección de ADN. En el diseño detallado, se seleccionó como biorreceptor una secuencia específica del alelo vacAs1 del gen vacA, debido a su alta prevalencia en cepas virulentas de H. pylori asociadas a la ulceración y cáncer gástrico. Se evaluó su estabilidad estructural a diferentes temperaturas para entender cómo las condiciones térmicas afectan la estabilidad de la hebra, su especificidad mediante la introducción de SNPs —analizando los cambios en ∆G, ∆H y ∆S—, y el comportamiento de interacción del dúplex con el fluido, así como su estabilidad en términos energéticos, con una energía total de –133.014 kJ/mol a 25 °C bajo condiciones simuladas de fluido gástrico. Además, se exploró una estrategia de detección sin marcadores, aprovechando la estructura y propiedades redox de la secuencia.
Las nanopartículas de oro (AuNPs), inmovilizadas sobre un material semiconductor debido a su afinidad con el enlace Au–S, facilitaron la inmovilización del ADN tiolado correspondiente al gen vacAs1 en la superficie del electrodo, mejorando así la señal de corriente. Finalmente, mediante simulaciones in silico, se evaluó el comportamiento físico del biorreceptor y, mediante voltamperometría cíclica, se determinó una señal electroquímica que permitió establecer un límite de detección de 6,79 ×10^(-13) M. Este diseño in silico representa un avance en la detección electroquímica de H. pylori, ofreciendo una alternativa más sensible y menos invasiva para entornos clínicos.
Descripción
Abstract
Helicobacter pylori is a bacterium that colonizes the gastric mucosa and is associated with diseases such as gastritis and gastric cancer, posing challenges for its detection due to the limited sensitivity and specificity of current methods. In this context, biosensors emerge as a promising alternative, although their sensitivity and stability largely depend on the selection of the transducer, bioreceptor, and immobilization strategy.
This study develops the bioreception-transduction stage of an electrochemical genosensor for the detection of Helicobacter pylori in gastric fluid samples. Initially, a conceptual design was established considering the physicochemical properties of the fluid, selecting a gold screen-printed electrode with a modified surface to improve sensitivity in DNA detection. In the detailed design, a specific sequence of the vacAs1 allele of the vacA gene was selected as a bioreceptor, due to its high prevalence in virulent strains of H. pylori associated with gastric ulceration and cancer. Its structural stability at different temperatures was evaluated to understand how thermal conditions affect strand stability, its specificity by introducing SNPs -analyzing changes in ∆G, ∆H and ∆S-, and the interaction behavior of the duplex with the fluid, as well as its stability in energetic terms, with a total energy of -133.014 kJ/mol at 25 °C under simulated gastric fluid conditions. In addition, a markerless detection strategy was explored, taking advantage of the structure and redox properties of the sequence.
Gold nanoparticles (AuNPs), immobilized on a semiconductor material due to their affinity for the Au–S bond, facilitated the immobilization of thiolated DNA corresponding to the vacAs1 gene on the electrode surface, thereby improving the current signal. Finally, through in silico simulations, the physical behavior of the bioreceptor was evaluated, and cyclic voltammetry determined an electrochemical signal that allowed establishing a detection limit in the range of 6,79 ×10^(-13) M. This in silico design represents an advancement in the electrochemical detection of H. pylori, offering a more sensitive and less invasive alternative for clinical settings.
Palabras clave
Helicobacter pylori, vacA, Biosensores, Genosensores, Inmovilización, Hibridación, In silico
Keywords
Helicobacter pylori, vacA, Biosensors, Genosensors, Immobilization, Hybridization, In silico