Análisis del polimorfismo rs235768 del gen BMP2 en individuos con secuela de labio y paladar hendido y sus parientes en primera línea de consanguinidad
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Resumen
Antecedentes: El labio y paladar hendido (LPH) es una malformación congénita que se originan por la falta de fusión del labio y las prolongaciones palatinas, lo cual repercute tanto la función como la estética facial del recién nacido. Estas anomalías se encuentran entre los defectos congénitos más frecuentes a nivel mundial y pueden ocasionar dificultades en la alimentación, el habla, la audición y el desarrollo dental. En Colombia su prevalencia es del 3.37:10000 nacidos vivos y su etiología es multifactorial, involucrando tanto factores genéticos como ambientales. Dentro de los genes involucrados se encuentra la proteína morfogénica ósea (BMP2). Recientemente se identificó el polimorfismo RS235768, que produce un cambio de A por T que se asocia como factor de riesgo para la generación de fisuras. En Colombia no se ha evaluado la presencia del polimorfismo y su correlación con la aparición de LPH.
Objetivo: Determinar la frecuencia de anomalías menores y la presencia del polimorfismo en individuos con secuela LPH, sus parientes en primer grado de consanguinidad e individuos control.
Metodología: Estudio descriptivo de corte transversal en el que se seleccionaron 121 individuos con LPH (Pacientes), 121 Parientes y 727 controles (sin LPH ni parentesco). Se evaluó la presencia de anomalías menores en los parientes y se extrajo ADN a partir de muestras de saliva de los tres grupos experimentales. Se amplificó por PCR la región cercana al polimorfismo. El amplicón fue secuenciado por el método de Sanger. El análisis del polimorfismo se hizo mediante el programa Finch TV, Geospiza y se determinó la frecuencia alélica, genotípica y los Odds Ratio entre los grupos evaluados. El polimorfismo fue confirmado mediante restricción enzimática (BsrI). Para el análisis de las anomalías menores se realizó un análisis inferencial bivariado mediante Chicuadrado y test exacto de Fisher. Para analizar las frecuencias alélicas y fenotípicas se utilizó prueba de chi-cuadrado, Mc Neamar y Pearson. Se calcularon odds ratios crudos y ajustados con sus intervalos de confianza del 95%.
Resultados: Dentro de las anomalías menores más frecuentes en Parientes se encontró asimetría en narinas y en pabellones auriculares. En la frecuencia alélica se encontró similar porcentaje en el Alelo 1 de A (44%) o T (56%). El Alelo 2 mas frecuente en los grupos fue T (91%), mientras que A solo se encontró en el 8 % del total de individuos (P=0,03). El genotipo mas frecuente fue TT encontrándose 48,8% en Parientes, 50,4% en Pacientes y 58,2 % en Controles. El genotipo menos frecuente fue AA en todos los grupos. Este genotipo fue mas frecuente en Pacientes que en Parientes (P=0,02); mientras que el genotipo AT fue mayor en Parientes que en Controles (P=0,01) y el TT fue mayor en Controles que en Parientes (P=0,05). El genotipo AA fue mas frecuente en Pacientes que en Controles (P=0,04). Al evaluar la asociación de los genotipos con la presencia de LPH se determinó que el genotipo AA presenta 73% mayor probabilidad de tener LPH (ORa 1,73 (1,10-9,26) P=0,03) al comparar Parientes y Pacientes. Al analizar los Parientes y los Controles se evidenció que el genotipo AT tiene 58% mayor probabilidad de LPH (Ora 1,58 (1,06-2,37) P=0,024), mientras que los individuos del grupo Control o Parientes que presenten el genotipo TT tiene menor probabilidad de presentar la fisura (Ora 0,63 (0,42-0,94) P=0,024).
Conclusión: El genotipo AA incrementa significativamente la probabilidad de presentar LPH, siendo más frecuente en pacientes afectados que en sus parientes y controles. El genotipo AT en parientes también se asocia con un mayor riesgo de LPH en grupos familiares de pacientes con LPH en comparación con controles de la población general. Por el contrario, el genotipo TT se relaciona con una menor probabilidad de desarrollar la malformación.
Descripción
Abstract
Background: Cleft lip and palate (CLP) is a congenital malformation caused by the failure of the lip and palatal extensions during fusion, which affects both the function and facial aesthetics of the newborn. These anomalies are among the most common congenital defects worldwide and can cause difficulties in feeding, speech, hearing, and dental development. Colombian prevalence is 3.37:10,000 live births, and its etiology is multifactorial, involving both genetic and environmental factors. One of the genes involved is bone morphogenetic protein (BMP2). Recently, the RS235768 polymorphism was identified, which produces a change from A to T that is associated as a risk factor for the occurrence of a cleft. In Colombia, the presence of the polymorphism and its correlation with the appearance of CLP has not been evaluated.
Objective: To determine the frequency of minor anomalies and the presence of the polymorphism in individuals with CLP sequelae, their first-degree relatives, and control individuals.
Methodology: A descriptive cross-sectional study in which 121 individuals with LPH (patients), 121 relatives, and 727 controls (without CLP or kinship) were selected. The presence of minor anomalies in relatives was evaluated, and DNA was extracted from saliva samples from the threeexperimental groups. The region near the polymorphism was amplified by PCR. The amplicon was sequenced using the Sanger method. The polymorphism was analyzed using the Finch TV program, Geospiza, and the allele frequency, genotype, and odds ratio between the evaluated groups were determined. The polymorphism was confirmed by enzyme restriction (BsrI). For the analysis of minor anomalies, a bivariate inferential analysis was performed using the chisquare and Fisher's exact tests. To analyze allele and phenotype frequencies, the chi-square, McNeamar, and Pearson tests were used. Crude and adjusted odds ratios were calculated with their 95% confidence intervals.
Results: Among the most frequent minor anomalies in relatives were asymmetry in the nostrils and ears. In terms of allele frequency, a similar percentage was found in Allele 1 of A (44%) or T (56%). The most frequent allele 2 in the groups was T (91%), while A was only found in 8% of the total individuals (P=0.03). The most frequent genotype was TT, found in 48.8% of relatives, 50.4% of patients, and 58.2% of controls. The least frequent genotype was AA in all groups. This genotype was more frequent in patients than in relatives (P=0.02), while the AT genotype was higher in relatives than in controls (P=0.01) and TT was higher in controls tan in relatives (P=0.05). The AA genotype was more frequent in patients than in controls (P=0.04). When evaluating the association of genotypes with the presence of LPH, it was determined that the AA genotype has a 73% higher probability of having LPH (ORa 1.73 (1.10-9.26) P=0.03) when comparing relatives and patients. When analyzing relatives and controls, it was found that the AT genotype has a 58% higher probability of LPH (ORa 1,58 (1.06-2.37) P=0.024), while individuals in the control or relative group with the TT genotype are less likely to have the fissure (Ora 0,63 (0.42-0.94) P=0.024).
Conclusion: The AA genotype significantly increases the likelihood of having CLP, being more common in affected patients than in their relatives and controls. The AT genotype is also associated with a higher risk of LPH in relatives compared to controls. Conversely, the TT genotype is associated with a lower probability of developing the malformation.
Palabras clave
Genética, Labio y paladar hendido, Parientes, Polimorfismo, Proteína morfogénica ósea 2