Prueba de citoxicidad in vitro del diamino fluoruro de plata sobre cultivos de células HeLa
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1998
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Resumen
EI Diamino fluoruro de plata (DAFP) es una solución tópica que se utiliza en odontología al 38%, su manejo se ha descrito en paises como Brasil, Argentina y Japón. Sus indicaciones son basicamente como agente anticariogenico en nifios y para la hipersensibilidad dental en adultos. El propdsito de este estudio es el evaluar el comportamiento de toxicidad del DAFP sobre c€lulas HeLa. Se sembraron 12000 células por pozo en cajas de cultivo de 96 pozos, se incubaron en camara de C02 a 37°C por 24 horas. Posteriormente, se colocaron las diluciones del DAFP, retirando previamente el medio de cultivo, las diluciones usadas fueron 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800 y 1:1600 preparadas en medio de cultivo sin suero fetal bovino. El tiempo de exposición fue de 1 minuto, al cabo del cual se retir6 el agente, se lavaron las células con buffer de fosfato y se desprendieron por tripsinización para realizar un conteo por medio del método de exclusión con azul trypan usando una cámara de Neubauer, bajo microscopio invertido. El experimento se repiti6 tres veces cada uno con 4 réplicas de cada condici6n. Se encontr6 que las diluciones del DAFP usadas por un tiempo de exposición de 1 minuto, provocaron una severa dismupci6n de la monocapa celular, causando muerte en la totalidad de las células al usar las diluciones 1:400 y menores. En las diluciones 1:800 y 1:1600 se encontraron al momento del conteo células vitales, pero en baja proporción. El análisis estadístico (ANOVA de una sola via y un test de comparación de medias, DMS) mostr6 una diferencia entre los grupos con respecto al control con un valor de p<0,001. El agente probado prob6 tener un gran efecto de toxicidad en su aplicación directa sobre una línea celular de origen humano, en concentraciones hasta de 1000 veces menores y a un tiempo menor del que se recomienda para su uso cli'nico, asi pues el resultado del presente trabajo debe servir para alertar sobre el uso del medicamento en cuesti6n y permitir lanzar nuevos estudios que complementen los que se han realizado en clinica.
Descripción
Abstract
Silver diammine fluoride (DAFP) is a topical solution used in a 38% dilution in dentistry employed in countries such as Brasil, Argentina and Japan. The indications for use are basically as cariosutic in children and dental hipersensivity in aduits. The piirpose of this study is to evaluate the toxicity of DAFP over HeLa cells. 12000 cells were cultured for every well in culture boxes of 96 wells, they were incubated in a C02 chamber at 37° C for 24 hour. Then DAl=P dilutions Of 1:50,1:100,1:200,1:400, 1:800 and 1:1600 were poured in the wells previously retiring the culture media. The time Of contact was one minute, and at the end DAFP was withdrawn and the cells were washed in a phosphate buffered solution. The method used to yield the cells was trypsinizing,after this they were counted uslng the exclusion method with trypan blue in a counting Neubauer camera under an inverted microscope.The experiment was repetead three times, every one with four replicas Of every condition. We found that the dilution of DAFP used for a exposition time of one minute, provoques a severe disruption Of the slngle cell layer,causing the death of the totality of cells exposed to dilutions Of 1:400 and less. Dilution of 1:800 and 1:1600, yielded a diminution in the vital cell counts. The statlcal analysis (one way AI\lovA and measurent comparation test DMS), proved adiference between groups and controls of p<0,001. The agent used dernostrated a great toxicity when applied directly over a human cell line, even in concentrations 1000 less and in a fraction Of the time that those recommended for clinical use; therefore the results Of this work should warn Of the use Of this medicament and pemit that new studies complete those realized in practice.
Palabras clave
Diamino Fluoruro de plata, Citotoxicidad, Cultivos
Keywords
Cultures, Citotoxicity, Silver Diammine fluoride