Producción, purificación y evaluación catalítica de una Taq ADN polimerasa recombinante

Abstract

La Taq ADN polimerasa es una enzima utilizada en la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) y sus variantes. En este trabajo, se llevó a cabo la producción, purificación y evaluación funcional de una Taq polimerasa recombinante (r_TaqDNA-pol) mediante un sistema de expresión heterólogo en Escherichia coli BL21(DE3), utilizando el plásmido pOpenTaq. Se estandarizaron las condiciones óptimas de inducción con IPTG, temperatura de cultivo y tiempos de incubación, a fin de maximizar la expresión soluble de la enzima. La Taq polimerasa recombinante fue purificada mediante un protocolo que aprovecha su termoestabilidad, seguido de precipitación salina y cromatografía de exclusión molecular, obteniendo un producto con alta pureza. Este protocolo fue diseñado en el marco del presente trabajo como una propuesta metodológica original para la purificación eficiente de la enzima recombinante. La funcionalidad de la r_TaqDNA-pol fue confirmada mediante ensayos de PCR dirigidos a genes de interés, demostrando una eficacia comparable a la enzima comercial. Adicionalmente, se evaluó la sensibilidad, la termoestabilidad y la dilución funcional mínima de la enzima recombinante, consolidando su utilidad en contextos experimentales diversos. Estos resultados respaldan el uso de sistemas de expresión bacterianos como alternativa viable para la producción nacional de enzimas de uso crítico, reduciendo la dependencia de importaciones y garantizando el suministro de insumos claves para proyectos estratégicos de investigación biomédica.