Comparación del perfil proteico de venenos de serpientes de los generos bothrops, bothrocophias y crotalus provenientes del Valle Del Cauca Colombia (fundación zoológico de Cali) mediante el uso de cromatografía liquida de alta eficiencia HPLC y electroforesis
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2017
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Resumen
Los venenos de las serpientes son las secreciones más ricas en enzimas y toxinas presentes en la naturaleza, estos son una mezcla de moléculas tanto orgánicas como inorgánicas, tienen una composición y actividades enzimáticas variables, lo que hace que existan diferencias en los efectos locales y sistémicos causados por el envenenamiento no sólo entre distintas especies de la misma familia, sino también diferencias intraespecíficas entre poblaciones de distintas zonas geográficas, por esto se requiere un tratamiento clínico diferente para cada caso. En el caso de las serpientes de la familia Viperidae, en la cual se agrupan los géneros Bothrops, Bothrocophias y Crotalus, las proteínas son las moléculas más estudiadas no sólo por su gran abundancia en el veneno sino también por su alta diversidad en acciones biológicas en el rol que cumplen en el caso de un envenenamiento, estos no sólo son los venenos más complejos, en comparación con los de los venenos de otras familias, sino también contienen las proteínas de mayor peso molecular. En este trabajo se buscaba comparar los perfiles proteicos de venenos de serpientes de los géneros Bothrops, Bothrocophias y Crotalus, lo cual se llevó a cabo, inicialmente mediante la cuantificación del contenido proteico de los venenos mediante espectrofotometría por los métodos de Bradford, Lowry y una medición directa por Nanodrop®, seguido del análisis de los perfiles proteicos de los venenos por cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC), utilizando una columna Lichosper 100 RP c18 de dimensiones 250X4 mm y poro de 5um,.y por electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS PAGE) para estimar el peso molecular de algunas proteínas observadas en este último método. Se observó que el veneno de los géneros Bothrocophias y Crotalus es el que presenta mayor porcentaje de proteína, mientras que la caracterización de los perfiles proteicos mediante cromatografía y electroforesis evidenciaron que las proteínas más representativas de los venenos de las serpientes pertenecientes a los tres géneros estudiados presentan pesos moleculares de 15 20 y 50KDa, y también se encuentran proteínas altamente polares separadas en los minutos 1.7 y 2.6 y una proteína medianamente polar en el minuto 35 de los cromatogramas.
Descripción
Abstract
Snake venoms are the richest secretions in enzymes and toxins present in nature, these are a mixture of both organic and inorganic molecules, they have a varying composition and enzymatic activities, which means that there are differences in local and systemic effects caused by poisoning not only among different species of the same family, but also intraspecific differences between populations of different geographical areas, for that reason a different clinical treatment is required for each case. In the snake venom of the viperidae family, in which the Bothrops, Bothrocophias and Crotalus genera are grouped together, proteins are the most studied molecules not only for their great abundance in the venom but also for their high diversity in biological actions in the role they play in the case of a poisoning, these are not only the most complex poisons, compared to the poisons of other families, but also contain the higher molecular weight proteins. In this work, we sought to compare the protein profiles of venom of snakes of the Bothrops, Bothrocophias and Crotalus genera, which was initially carried out by quantification of the protein content of the venoms by spectrophotometry by Bradford, Lowry and a direct measurement by Nanodrop®, followed by the analysis of venom protein profiles by high performance liquid chromatography (HPLC), using a Lichosper 100 RP c18 column of dimensions 250X4 mm and 5μm pore and by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS PAGE) to estimate the molecular weight of some proteins observed in the latter method. It was observed that the venom of Bothrocophias sp and Crotalus sp present the highest percentage of protein, whereas the characterization of the protein profiles by chromatography and electrophoresis showed that the most representative proteins of the venoms of the snakes belonging to the three genera studied have molecular weights of 15 20 and 50KDa, and there are also highly polar proteins separated at minutes 1.7 and 2.6 and a medium polar protein at 35 minutes of the chromatograms.
Palabras clave
Perfil proteico, Venenos de serpientes, Cromatografía liquida de alta eficiencia HPLC, Electroforesis
Keywords
Protein profile, Snake poisons, High Efficiency Liquid Chromatography, Electrophoresis