Participación de las proteínas HRS, TSG101, ALIX, CHMP4B y VPS4B del complejo ESCRT en la producción del virus dengue serotipo 2 en células A549

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https://hdl.handle.net/20.500.12495/5274

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Resumen

El complejo de clasificación endosomal requerido para el transporte, ESCRT (por sus siglas en inglés: Endosomal Sorting Complex Requires for Transport), está conformado por cuatro subcomplejos proteicos denominados ESCRT0, I, II y III y algunas proteínas accesorias. La función del complejo es favorecer la formación de vesículas intraluminales (ILV) dentro de los cuerpos multivesiculados. Algunas proteínas de la maquinaria ESCRT pueden participar durante la producción viral (entendido esto como el proceso de ensamblaje y la liberación viral) de algunos virus como el Virus de la fiebre Amarilla (YFV), el Virus de la Encefalitis Japonesa (JEV) y el Virus de la Hepatitis C (HCV), pertenecientes a la familia Flaviviridae. Por ejemplo, se ha reportado que el HCV, necesita de las proteínas Hrs, Alix, Vps4B y CHMP4B para el proceso de liberación. Sin embargo, no se conoce si todos los virus de la familia utilizan las proteínas del complejo para los mismos fines. En el caso particular del Virus del Dengue (DENV) -uno de los flavivirus de mayor importancia epidemiológica- hasta el momento sólo se ha reportado la sobreexpresión de la proteína Alix durante la infección con este virus en células endoteliales humanas, por lo tanto se desconoce si este virus utiliza para su ensamblaje o liberación alguna de las proteínas de ESCRT. En el presente trabajo, se planteó como objetivo principal evaluar la participación de las proteínas Hrs, TSG101, Alix, CHMP4B y Vps4B en la producción del DENV-2. Para lograrlo, se disminuyó la expresión (Knock-down) de cada una de las proteínas en células A549 utilizando ARNs de interferencia (ARNsi), y posteriormente se evaluó su efecto sobre la transcripción, ensamblaje y liberación del DENV-2. Los resultados mostraron que el Knockdown de las proteínas Hrs, TSG101, Alix, CHMP4B y Vps4B no tuvo ningún efecto sobre la supervivencia de las células A549, tampoco sobre la entrada, transcripción o traducción del DENV-2 en las células. Sin embargo, la expresión disminuida de las proteínas Hrs, Alix o CHMP4B tuvo un efecto sobre la cantidad de virus ensamblados. La disminución en la expresión de CHMP4B también tuvo un efecto en la liberación viral. A diferencia de esto, la disminución de TSG101 y Vps4B no tuvo ningún efecto sobre la producción viral, indicando que estas dos proteínas no participan en la producción de DENV. Estos resultados sugieren que el DENV-2 solo requiere de algunas de las proteínas del complejo para promover la producción viral. El producto de este trabajo es la primera evidencia directa que demuestra la participación de algunas proteínas del complejo ESCRT en la producción del virus DENV-2.

Descripción

Abstract

The endosomal sorting complex required for transport (ESCRT) consists of four complexes called ESCRT-0, I, II and III, and other accessory proteins that are sequentially recruited to the endosomal membrane to promote the formation of intraluminal vesicles (ILVs) within multivesicular bodies. Similarly, viruses can use the ESCRT pathway to bud from the plasma membrane in a reaction that is equivalent to the budding of ILVs. There is evidence that some ESCRT proteins can participate during viral assembly or viral budding of virus belonging to the Flaviviridae family such as Yellow Fever Virus (YFV), Japanese Encephalitis Virus (JEV) and Hepatitis C Virus (HCV). Dengue virus (DENV) is one of the flavivirus of main epidemiological importance and there is no data relating ESCRT and DENV further than a proteomic analysis in which Alix was overexpressed during the infection of human endothelial cells with DENV. The aim of this work was to evaluate the role of Hrs, TSG101, Alix, CHMP4B and Vps4B proteins in the entry, transcription, translation, assembly or budding of DENV-2. To achieve this objective, the expression of these five proteins in A549 cells was decreased (knockdown) using interfering RNAs (siRNA). The effect of these knockdown assays on transcription, assembly and release of DENV-2 was evaluated. The knockdown of Hrs, TSG101, Alix, CHMP4B and Vps4B proteins had no effect on survival of A549 cells, neither on the entry, transcription or translation of DENV-2. However, the decreased expression of Hrs, Alix or CHMP4 had an effect on the amount of assembled viruses. The decreased expression of CHMP4 had also an effect on the viral release. On the contrary, the knockdown assays on TSG101 and Vps4B did not show any effect on the viral assembly or viral release, suggesting that these two proteins do not participate during DENV-2 production. The results of this work are the first direct evidence of the participation of some ESCRT proteins in the production of DENV-2 virus. The role of ESCRT proteins can occur during the vesicle formation and viral protein assembly or during the release of the viral particle.

Palabras clave

Complejo ESCRT, Virus dengue, Células A549, ARNsi, Ensamblaje viral, Producción viral

Keywords

Complex ESCRT, Dengue virus, A549 cells, siRNA, Viral assembly, Viral production

Temáticas

Dengue
Células A549
Agregado de proteínas

Citación

Colecciones

Maestría en Ciencias Básicas Biomédicas