Producción y caracterización de un anticuerpo policlonal dirigido contra la fosfoproteína del virus de la rabia
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Fecha
2007
Título de la revista
Publicado en
Biomédica : Revista del Instituto Nacional de Salud, 0120-4157, Vol.27, Num.2, 2007 p. 257-267
Publicado por
Instituto Nacional de Salud
ISSN de la revista
Título del volumen
Resumen
Introducción. La producción de una proteína viral recombinante facilita la aplicación de diversasmetodologías bioquímicas en investigación básica de los virus con relevancia clínica. Además,la obtención de un anticuerpo policlonal dirigido contra la proteína P permite el estudio de sufunción y está soportado en la inexistencia de un anticuerpo comercial dirigido contra esaproteína.
Objetivo. Producir y caracterizar un anticuerpo policlonal dirigido contra la proteína Precombinante del virus de la rabia expresada en Escherichia coli.
Materiales y métodos. El gen P que codifica para la proteína P del virus de la rabia, fueamplificado por reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa reversa y clonado en elvector de expresión PinPointTM Xa-1 T (PROMEGA). La proteína recombinante P fue expresadaen E. coli purificada por cromatografía de afinidad y usada para la producción del anticuerpopoliclonal anti-P. El anticuerpo obtenido fue purificado y caracterizado por inmunocitoquímicacon un sistema enzimático, inmunofluorescencia, Cell-ELISA fluorométrica y Western blotting.
Resultados. La proteína recombinante se expresó eficientemente como una proteína de fusiónbiotinilada de aproximadamente 50 kd, que corresponde a la forma completa de la proteína Pdel virus de la rabia. El anticuerpo policlonal anti-P detectó con alta especificidad la proteína Pen cultivos de neuronas sensoriales infectados con el virus de la rabia.
Conclusión. La proteína P recombinante expresada en E. coli se constituyó en un antígenoespecífico para producir un anticuerpo policlonal que reconoce la proteína P nativa en célulasinfectadas con el virus de la rabia.
Descripción
Abstract
Introduction. The expression of recombinant viral proteins has been a useful tool to studymolecular biology and pathogenesis of virus infections. Because commercial specific antibodiesto rabies virus phosphoprotein (P) are currently unavailable, these antibodies must be generatedde novo in order to study the role of P protein during the infectious process.Objective. A polyclonal antibody was produced and characterized for use against thephosphoprotein (P) of rabies virus. The antibody was raised in rabbits with a recombinant viralphosphoprotein (P) produced in Escherichia coli.
Materials and methods. Gene P coding for the viral phosphoprotein (P) was amplified by RT-PCR and cloned into the expression vector PinPointTM Xa-1 T. The recombinant protein P wasexpressed in Escherichia coli, purified by affinity chromatography and used to produce apolyclonal antibody anti-P. The antibody anti-P was purified and characterized byimmunocytochemistry, immunofluorescence, fluorometric CELL-ELISA and Western blotting.
Results. The recombinant viral phosphoprotein was successfully expressed as a 50 kdbiotinylated fusion protein which corresponds to the whole protein P of rabies virus. Thepolyclonal antibody raised against this recombinant protein P was able to detect with highspecificity, protein P in cultures of sensorial neurons infected with rabies virus.
Conclusions. The P protein obtained from heterologous expression in Escherichia coli becamea specific antigen that was used to produce a polyclonal antibody capable of detecting nativeP protein in rabies virus infected cells.
Palabras clave
Virus de la rabia, Inmunoquímica, Fosfoproteínas
Keywords
Escherichia coli, Recombinant protein, Rabies virus
Temáticas
Virus
Formación de anticuerpos
Rhabdoviridae
Aminoácidos, péptidos y proteínas
Formación de anticuerpos
Rhabdoviridae
Aminoácidos, péptidos y proteínas