Examinando por Autor "Bohada Martinez, Maria Camila"

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    Comparación de la expresión de RANKL y OPG en adolescentes y adultos tratados con ortodoncia correctiva-estudio piloto
    (2024-07) Bohada Martinez, Maria Camila; Del Castillo Casas, Maria Camila; Escobar Marquez, Lina Maria; Martinez Saab, Erika; Mora Diaz, Ingrid Isabel
    Antecedentes: dos marcadores importantes en el metabolismo óseo son el activador del receptor para el ligando del factor nuclear k b (RANKL) y la osteoprotegerina (OPG). Algunos estudios sugieren que la edad conduce a una expresión diferencial de estos marcadores. Es importante determinar si la edad influye significativamente en el proceso de remodelación, inflamación y velocidad de movimiento dental. Pocos estudios han evaluado la edad de los pacientes como una variable que puede influir en la inducción y modulación del proceso inflamatorio inducido por carga mecánica, así como en la velocidad de movimiento alcanzada en estos pacientes durante fases del tratamiento de ortodoncia, como alineación, nivelación. y retracción canina. por esto, se necesitan más estudios para comprender mejor el papel del sistema OPG/RANKL en la remodelación ósea durante el movimiento dental ortodóntico en pacientes de diferentes edades y fases de tratamiento. Objetivo: Comparar los niveles de expresión de RANKL y OPG en una muestra piloto de pacientes adultos y adolescentes con tratamiento de ortodoncia. Métodos: Para estandarizar el método, se siguieron criterios de inclusión y exclusión, se analizaron cinco pacientes entre 14 y 40 años. Se tomaron muestras de fluido crevicular gingival (FCG) de la zona distal del canino superior derecho, siguiendo el protocolo establecido por Rody et al., 2014. La extracción de ARN se realizó a partir de las muestras de FCG utilizando el kit quick-RNA, según las instrucciones del fabricante. Se cuantificó el ARN obtenido y s evaluó su calidad mediante espectrofotometría. El ADNc se obtuvo mediante transcripción inversa utilizando el protocolo del kit de síntesis de ADNc de primera hebra protoscript II. La técnica (RT-PCR) se realizó utilizando el kit luna universal para determinar niveles de expresión de RANKL y OPG. La amplificación y eficiencia se analizaron utilizando el programa de PCR Linreg. Se realizaron lecturas correspondientes a RANKL y OPG de forma individual para determinar el nivel de expresión en las muestras. Como control de expresión se analizó el gen GAPDH. Resultados: Inicialmente se estandarizó la forma más adecuada y eficiente de obtener una muestra para amplificación por PCR a partir del FCG recolectado. Método 1: extracción de ARN+RT+PCR. Para obtener ARN puro de mejor calidad, se utilizó el método 1. El ARN obtenido se cuantificó y analizó su calidad y pureza mediante la evaluación de las curvas de espectrofotometría. Se logró una amplificación adecuada de genes RANKL y OPG en 5 individuos bajo tratamiento de ortodoncia. La expresión de RANKL aumentó en t1 en comparación con t0; Se observó un aumento significativo de OPG en t1. Conclusiones: Es importante realizar un control de la placa antes de tomar la muestra. Las cantidades de muestra obtenidas fueron suficientes para analizar la amplificación de RANKL y OPG. La extracción de ARN se estandarizó mediante el método 1 porque permitió obtener mayor cantidad de ARN, con calidad suficiente para realizar la PCR.