Caracterización genética de aislamientos de Klebsiella pneumoniae resistente a carbapenémicos
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2011
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Resumen
Introducción: Klebsiella pneumoniae es el primer patógeno de importancia clínica en unidades de cuidado intensivo de instituciones de tercer nivel en Colombia. A nivel mundial se ha reportado la emergencia de aislamientos clínicos multirresistentes de K. pneumoniae productores de enzimas con actividad hidrolíticas sobre carbapenémicos, lo cual es considerado un problema de salud a nivel mundial. Objetivo general: Determinar molecularmente los principales mecanismos de resistencia a antibióticos de uso clínico como B-lactámicos, tetraciclinas y sulfonamidas en aislamientos de Klebsiella pneumoniae multirresistentes, causantes de un brote en una institución de tercer nivel en Bogotá D.C. Materiales y Métodos: Se analizaron 26 aislamientos de K. pneumoniae resistentes a imipenem y/o meropenem provenientes de una institución hospitalaria de tercer nivel de Bogotá. Identificadas por medio automatizado. La confirmación de especie se realizó por medio de la amplificación del gen khe, la confirmación de la resistencia a antibióticos B-Lactámicos se realizó por medio de la amplificación de los genes blaTEM, blaSHV, blaCTXM, AmpC plasmídico y blaKPC, este último es especifico, para la carbapenemasa de K. pneumoniae, cuya variante fue confirmada por medio de una restricción enzimática con la endonucleasa RsaI. La corresistencia a otros antibióticos se determinó por la amplificación de los genes qnrA, qnrB y qnrS (quinolonas), Sul1, Sul2 y Sul3 (sulfonamidas), TetA, TetB, TetC (tetraciclinas). Adicionalmente se verifico la presencia de plataformas genéticas como integrones clase 1,2 y 3. Resultados: De los 26 aislamientos de K. pneumoniae analizados, 16 aislamientos fueron recuperados a partir de muestras clínicas y 10 aislamientos de muestras ambientales. En la totalidad de los aislamientos analizados, se detectó la presencia de el gen bla KPC-3,blaSHV. En el 92,3% de los aislamientos de determino presencia de Sul1, TetA50%,qnrB 15,3%, qnrA 3,8%. Ninguno de los aislamientos presentó los genes TetB, TetC, Sul2, Sul 3,qnrS, bla CTX-M y AmpC plasmídico. Por método automatizado solo 65,4% de los aislamientos fueron identificados como productores de BLEE. Se determinó que el 100% de los aislamientos contenían el integron de clase 1, los integrones de clase 2 y 3 no se encontraron en los aislamientos analizados. Conclusiones: Los aislamientos de K. pneumoniae analizados poseen alta frecuencia en la circulación en hospitales, K. pneumoniae cuenta con resistencia a múltiples antibióticos de uso clínico como quinolonas, tetraciclinas y B- lactámicos de última generación como carbapenémicos, este último por la presencia de carbapenemasas tipo KPC-3, lo cual disminuye considerablemente las opciones terapéuticas para el control de infecciones causadas por estos patógenos. Se resalta la importancia de la confirmación molecular de estos mecanismos de resistencia puesto que 62% de los aislamientos no fueron identificados como productores de BLEE por métodos microbiológicos automatizados.
Descripción
Abstract
Introduction: Klebsiella pneumoniae is the first clinically important pathogen in intensive care units of tertiary institutions in Colombia. Globally it has been reported the emergence of multidrug-resistant clinical isolates of K. pneumoniae producing hydrolytic enzymes with activity on carbapenems, which is considered a health problem worldwide. Objective: Determine the key molecular mechanisms of resistance to antibiotics in clinical use as B-lactams, tetracyclines and sulfonamides in isolates of multidrug-resistant Klebsiella pneumoniae, causing an outbreak in a tertiary institution in Bogota Materials and Methods: We analyzed 26 isolates of K. pneumoniae resistant to imipenem and /or meropenem institution from a third level hospital in Bogota. Identified by automated means. Confirmation of species was made by khe gene amplification, confirmation of resistance to beta-lactam antibiotics was performed by amplification of the genes blaTEM, blaSHV, blaCTXM, AmpC plasmid and blaKPC is specific to the carbapenemase from K. pneumoniae, which variant was confirmed by a restriction enzyme with the endonuclease RsaI. The resistance of other antibiotics was determined by amplification of genes qnrA, qnrB and qnrS (quinolone), Sul1, Sul2 and Sul3 (sulfonamides), TetA, TetB, TetC (tetracyclines). Additionally, verify the presence of genetic platforms as class 1, 2 and 3 integrons. Results: Of the 26 isolates of K. pneumoniae tested, 16 isolates were recovered from clinical specimens and 10 isolates from environmental samples. In all the isolates tested, we detected the presence of the gene blaKPC-3, blaSHV. In 92.3% of the isolates determined Sul1 presence, TetA50%, qnrB 15.3%, qnrA 3.8%. None of the isolates presented genes TetB, TetC, Sul2, Sul3, qnrS, blaCTX-M and AmpC plasmid. For automated method only 65.4% of the isolates were identified as ESBL producers. It was determined that 100% of the isolates containing the integron class 1 integrons of class 2 and 3 were not found in the isolates analyzed. Conclusions: Isolates of K. pneumoniae have analyzed high frequency in the circulation in hospitals, K. pneumoniae with resistance to multiple antibiotics in clinical use as quinolones, tetracyclines and B-lactams and carbapenems last generation, the latter by the presence of carbapenemase KPC-3 type, which significantly reduces the therapeutic options for the control of infections caused by these pathogens. This highlights the importance of molecular confirmation of these mechanisms of resistance as 62% of the isolates were not identified as ESBL producers by automated microbiological methods.
Palabras clave
Klebsiella pneumoniae, Carbapenemasas, Resistencia bacteriana
Keywords
Klebsiella pneumoniae, Carbapenemase, Bacterial resistance