Efecto de la N-acetilcisteina sobre la viabilidad y proliferación de células madre de origen pulpar en esferoides 3D
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2022
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Resumen
Antecedentes: La N-acetilcisteína (NAC), un profármaco de cisteína y precursor del glutatión (GSH), inhibe la inflamación/señalización de NF-κB y la expresión de citocinas proinflamatorias. Debido a estas propiedades, la NAC podría utilizarse en la terapia pulpar vital (TPV). Objetivo: Evaluar el efecto in vitro de NAC sobre la viabilidad y proliferación de esferoides de células madre de pulpa dental humana (DPSCs). Metodología: El efecto de NAC sobre la viabilidad en cultivo monocapa de DPSC se determinó con el ensayo Alamar blue, la concentración citotóxica 50 se evaluó utilizando las concentraciones de 01mM, 0.5mM, 1mM, 1.83mM, 2.5mM y 3 mM) en tres tiempos diferentes (24h, 48h y 72h). La caracterización morfológica de los esferoides de DPCS se determinó con análisis de imágenes utilizando el software AnaSP2 para evaluar la homogeneidad morfológica. Los cambios en los parámetros morfológicos se midieron antes y después del tratamiento con NAC durante 72h en los esferoides. Todos los experimentos se realizaron por sixtiplicados y se repitieron dos veces. Se utilizó el software GraphPad Prism para las gráficas y para determinar la media y la desviación estándar. Resultados: En los parámetros de morfología evaluados en los esferoides de DPSCs se evidencia cambios significativos en área, volumen y perímetro incrementando significativamente entre los esferoides pretratados y postratados con NAC a 1,83Mm durante 72h. Conclusiones: La NAC incrementa la viabilidad y proliferación celular en esferoides de DPSCs según los resultados obtenidos. Se hace necesario evaluar sobre este modelo experimental más concentraciones para identificar la que mejor promueva la viabilidad y proliferación celular.
Descripción
Abstract
Background N-Acetylcysteine (NAC) a cysteine prodrug and glutathione (GSH) precursor, inhibits inflammation/NF-κB signaling and expression of proinflammatory cytokines. Possessing antimicrobial property and exerts anticarcinogenic and antimutagenic effects against certain types of cancer. Due to these properties, NAC could be used in vital pulp therapy (VPT). Aim Evaluate the in vitro effect of NAC on the viability and proliferation of human dental pulp stem cell (DPSCs) spheroids. Methods The effect of NAC on viability of monolayer culture of DPSCs was determined by Alamar blue assay, the cytotoxic concentration 50 will be evaluated using different concentrations (01, 0.5, 1, 1.83, 2.5 and 3 mM) in three different times (24h, 48h and 72h). The morphological characterization of DPCSs spheroids was determined with image analysis using AnaSP2 software were used to achieve morphological 2D and 3D (volume, sphericity, solidity, convexity) parameters to assess morphological homogeneity. Changes in morphological parameters will be measured before and after NAC for 72h treatment on the DPSC spheroids. All experiments was done in sixtiplicates and repeated two times. GraphPad Prism software was used for the graphys and for determined the mean and standard desviation. Results In the morphology parameters evaluated on spheroids of DPSCs, significant changes in area, volume and perimeter are evidenced, increasing significantly between the spheroids pre-treated and post-treated with NAC at 1.83Mm for 72h. Conclusions: NAC increases cell viability and proliferation in spheroids of DPSCs according to the results obtained. More studies are required to evaluate more concentrations of NAC with this experimental model and the study of other variables such as differentiation to be able to use NAC in VPT.
Palabras clave
N-Acetilcisteína, Células madre de pulpa dental, Proliferación, Formación de esferoides
Keywords
N-acetylcysteine, Dental pulp stem cells, Proliferation, Spheroid formation