Desarrollo y validación de un método de cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) para separar y cuantificar saponinas en el extracto de la iguaraya (stenocereus griseus), como posible agente antiinflamatorio
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2022
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Resumen
La colitis es un trastorno gastrointestinal, que consiste en la inflamación del intestino grueso o colon, y su causa suele ser desconocida. Este trastorno puede afectar a gran parte de la población, y puede ocasionar complicaciones serias. Actualmente, existen medicamentos y plantas medicinales para tratar este tipo de problemas.
A lo largo de los años, la comunidad indígena Wayuu, ubicada en el departamento de la Guajira de Colombia, ha tratado estos problemas con recursos naturales de su entorno, debido a su apego a los métodos de la medicina tradicional Wayuu, y al ineficiente sistema de salud que poseen. Uno de los recursos utilizados por esta comunidad, es el fruto del cardón guajiro, conocido como Iguaraya.
El presente proyecto tiene como objetivo, desarrollar y validar un método para la separación y cuantificación de saponinas en la iguaraya, fruto de la planta anteriormente mencionada; y estudiar su posible efecto antiinflamatorio de acuerdo con la concentración encontrada. Para cumplir con este objetivo, se usaron diferentes recursos bibliográficos para una revisión profunda del tema y el desarrollo de la parte experimental, que inició con la preparación del extracto metanólico del fruto, para posteriormente desarrollar el método de separación de saponinas presentes en la pulpa y semillas del fruto por medio de HPLC, y su respectiva cuantificación por medio del método de estándar externo. Se usó la Cromatografía Líquida de Alta Resolución en fase reversa. Para esto, se utilizó como patrón estándar diosgenina, y como material principal se utilizó el extracto de Iguaraya. Se cuantificó la cantidad de saponinas presentes en 26,2433 ± 0,0001 g de pulpa y semillas del fruto, y se encontró una concentración de 36,36 ± 0.0007 ppm; de esto se pudo inferir gracias a otros estudios, que esta concentración sí puede generar un efecto antiinflamatorio. Por último, se hizo la validación del método desarrollado, donde inicialmente, se tomó como referencia lo establecido en la guía de validaciones de la Conferencia Internacional sobre Armonización (ICH) Q2, y se modificaron los criterios de trabajo de manera que se permitiera una optimización de las condiciones cromatográficas para la separación y cuantificación de las saponinas en el extracto de la Iguaraya.
Descripción
Abstract
Colitis is a gastrointestinal disorder, which consists of inflammation of the large intestine or colon, and its cause used to be unknown. This disorder can affect a large part of the population and can cause serious complications. Currently, there are pharmacological and natural treatments for this type of problem.Over the years, the Wayuu community, located in the department of La Guajira, Colombia, has treated these problems with natural resources from their environment, due to their attachment to the methods of traditional Wayuu medicine, and the inefficient health system of the region. One of the resources used by this community is the fruit of the “cardón guajiro”, better known as Iguaraya.The main objective of this project is to develop and validate a method for the separation and quantification of saponins in the fruit of the mentioned plant, the iguaraya, and to evaluate its possible anti-inflammatory effect according to the concentration found. To meet this objective, different bibliographic resources were used for a review of the matter and the development of the experimental process, which began with the methanolic extract of the fruit, to subsequently develop the method of separation of saponins present in the pulp and seeds of the fruit by HPLC, and its respective quantification using the external standard method. Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography was used, for this, diosgenin was taken as standard pattern, and the Iguaraya extract was taken as main material. The amount of saponins present in 26,2403 ± 0,0001 g of fruit pulp and seeds was quantified, and a concentration of 36,3617 ± 0.0007 ppm was found; From this it could be inferred thanks to other studies, that this concentration does generate an anti-inflammatory effect. The experimental process ended with the validation of the developed method; initially, it was carried out taking as a reference the validation guidance of the International Conference on Harmonization (ICH) Q2, and the work criteria were modified in such a way as to allow to optimize the chromatographic conditions for the separation and quantification of saponins in the extract of the Iguaraya.
Palabras clave
Cromatografía Líquida de Alta Resolución, Saponinas, Colitis, Stenocereus griseus
Keywords
High Resolution Liquid Chromatography, Saponins, Colitis, Stenocereus griseus