Estandarización de una metodología para la cuantificación de títulos virales por citometría de flujo: virus dengue y zika
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Universidad El Bosque
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Resumen
The basic research in virology has a Standard Gold methodology for the calculation of viral titer which is the plating technique. However, this technique requires a wide availability of time and experiences by the experimenter; Therefore, proposing an alternative and equally reliable technique is a challenge that currently exists. For this reason, this project aims to statistically compare the results obtained between the traditional method and flow cytometry to see if it is feasible to use the latter as a routine technique in the quantification of viral loads. For this, three different cell lines (VERO, BHK-21 and U937-DC-SIGN) and the dengue (4 serotypes) and Zika viruses were used in a new protocol for flow cytometry which is based on the use of 2-fold serial dilutions of viral inoculum in order to obtain percentages of infected cells and then calculate the viral titers. The results obtained by flow cytometry were compared with those previously obtained by plaque assay, applying a correlation analysis. As a result, it was evident that the viral titers calculated using the BHK-21 cells correlated significantly with those reported by the plaque assay. Additionally, it was observed that the infectivity curves were different between the different cell lines used, showing different degrees of susceptibility to infection at the time of the test. In conclusion, our results show that the flow cytometry technique can be used as an alternative method for the quantification of viral particles, obtaining results that correlate with those obtained by plating, as long as BHK-21 cells are used.
Descripción
La investigación básica en virología tiene como metodología Gold Estándar para el cálculo de títulos virales la técnica de plaqueo. Sin embargo, esta técnica requiere una amplia disponibilidad de tiempo y experiencias por parte del experimentador; por lo que proponer una técnica alternativa e igualmente confiable, es un reto que existe actualmente. Por tal motivo, en este proyecto se pretende comparar estadísticamente los resultados obtenidos con el método tradicional y por citometría de flujo para observar si es viable utilizar esta última como una técnica de rutina en la cuantificación de cargas virales. Para esto, fueron utilizadas tres líneas celulares diferentes (VERO, BHK-21 y U937-DC-SIGN) y los virus dengue (4 serotipos) y Zika, en un nuevo protocolo para citometría de flujo que se basa en el uso de diluciones seriadas de inóculo viral con el fin de obtener porcentajes de células infectadas y de esta manera calcular los títulos virales. Los resultados obtenidos por citometría de flujo fueron comparados con los reportados previamente por plaqueo, aplicando un análisis de correlación. Como resultado, se evidenció que los títulos virales obtenidos usando las células BHK-21 se correlacionaron significativamente con los reportados por plaqueo. Adicionalmente, se observó que las curvas de infectividad fueron diferentes entre las distintas líneas celulares empleadas, mostrando diferentes grados de susceptibilidad a la infección en el tiempo del ensayo. En conclusión, nuestros resultados muestran que la técnica de citometría de flujo puede emplearse como un método alternativo para la cuantificación de partículas virales, obteniéndose resultados que correlacionan con los obtenidos por plaqueo, siempre y cuando se empleen las células BHK-21.
Abstract
Palabras clave
Título viral, Dengue, Zika, Plaqueo, Citometría de flujo
Keywords
Viral titer, Dengue, Zika, Plating Technique, Flow Citometry
Temáticas
Citometría de flujo -- Enfermedades virales
Metodología de estudio -- Enfermedades virales
Enfermedades virales -- Análisis
Metodología de estudio -- Enfermedades virales
Enfermedades virales -- Análisis