Evaluación del límite de detección del hemocultivo para identificación de porphyromonas gingivalis basado en droplet digital pcr en pacientes con periodontitis
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2019
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Resumen
Se ha descrito que uno de los principales agentes etiológicos que contribuye a la progresión de la periodontitis es la Porphyromonas gingivalis, además de la asociación con enfermedades sistémicas asociado al paso del microorganismo a la sangre. Se han utilizado diferentes técnicas moleculares como la PCR y los hemocultivos para la identificación de este periodontopatógeno en sangre. Sin embargo, el hemocultivo presenta desventajas frente a los métodos moleculares en cuanto a su sensibilidad, recientemente se desarrolló la ddPCR que reporta sensibilidades de hasta una copia de DNA. Comparar la detección de Porphyromonas gingivalis por hemocultivo y ddPCR a partir de sangre periférica en pacientes con periodontitis crónica después de cepillado dental. Se incluyeron 34 pacientes con periodontitis con previo consentimiento informado. Se realizó cepillado supervisado durante 2 minutos en cuatro tiempos diferentes (antes T0, inmediatamente terminado T1, a los 15 min posteriores T2 y una hora después T3) en los cuales se tomó una muestra de sangre periférica para la realización del hemocultivo, la detección y cuantificación mediante la ddPCR. En un total de 34 pacientes la detección de P. gingivalis por hemocultivo fue del 2,34% mientras que por ddPCR fue del 79,41% hasta T2. En 28 pacientes de realizó el análisis hasta el T3 en donde la detección de P. gingivalis por hemocultivo fue del 3,6% mientras que para ddPCR fue del 78,6%. De manera interesante a la hora del cepillado la cantidad de P. gingivalis disminuye hasta el 67,9%. En cuanto a la cuantificación la bacteremia alcanzó recuentos más altos en el T2 con una mediana de 6,25 copias/µL y un IQR: 2,5-39, mientras que para el análisis hasta el T3 los recuentos alcanzaron una mediana de 14 copias/µL IQR=0-86). Se demostró que para la detección de Porphyromonas gingivalis de pacientes con periodontitis a partir de sangre periférica la ddPCR es más sensible y rápido en comparación con el hemocultivo. Además, permite realizar la cuantificación de la bacteria.
Descripción
Abstract
One of the main ethiological agents contributing to the progression of periodontitis is the Porphyromonas gingivalis, in addition to the association with systemic diseases due to the microorganism’s transit through the bloodstream. Several molecular techniques have been used, such as PCR and haemo-cultures for identification of this periodonto-pathogen. However, the culture presents disadvantages in sensitivity with regards to molecular methods. Recently, ddPCR has been developed which reports sensitivities up to one DNA copy. To compare the detection of Porphyromonas gingivalis with haemo-culture and ddPCR in peripheral blood after brushing from patients with chronic periodontitis. The sample consisted of 34 patients with periodontitis, who had signed an informed consent. A brushing was carried out for two minutes during four different times (before T0, immediately after T1, after 15 minutes T2 and one hour after T3), after which a peripheral blood sample was taken for the culture, detection and quantification by ddPCR. The detection of P. gingivalis by haemo-culture among the 34 patients was of 2.34% and with ddPCR was 79.41% up to T2. The analysis was done on 28 patients up to T3, where detection of P. gingivalis by culture was 3.6% and ddPCR was 78.6%. The level of P. gingivalis diminishes with brushing up to 67.9% and bacterial quantification reached highest levels during T2 with a median of 6.25 copies/µL IQR: 2.5-39 and analysis for T3 reached a median count of 14 copies/µL IQR=0-86. Detection of Porphyromonas gingivalis from peripheral blood with ddPCR is more sensitive and faster compared to the haemo-culture. Additionally, it allows bacterial quantification.